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雌激素是一种性类固醇激素,在维持鸡胚卵巢正常发育中具有重要作用;细胞色素P450芳香化酶是雌激素生物合成的关键限速酶,由CYP19A1编码。本研究通过定量PCR和放射免疫法分别检测雌胚性腺中CYP19A1和雌激素的时间表达谱,并利用组织切片与免疫荧光技术检测雌胚性腺中芳香化酶的空间表达谱;同时通过5′RACE技术确定了CYP19A1在雌胚性腺和在成年母鸡脑中使用的特异转录本;还通过分离和培养的鸡前体颗粒细胞,利用双荧光素酶报告系统、定量PCR及WB实验探究FOXL2对雌胚性腺中CYP19A1的转录调控作用;最后,利用JASPAR2018对可能调控CYP19A1启动子的候选转录因子进行预测,并运用双荧光素酶报告系统对候选转录因子进行筛选,再通过定量PCR对候选转录因子的调控作用进行验证。主要研究结果如下:(1)CYP19A1在鸡雌胚性腺中的表达开始于E5.5-E6.5,之后逐渐递增,在E13.5达到最高水平,然后开始下降,但在E18.5之前,其表达水平仍然很高;雌激素的表达趋势与CYP19A1的表达趋势基本一致,只是略晚于CYP19A1的表达。(2)在E6.5-E18.5雌胚左侧性腺中,芳香化酶主要表达于以FOXL2标记的髓质层前体颗粒细胞的细胞质中,而在以VASA标记的皮质层生殖细胞中不表达,芳香化酶和FOXL2在整个胚胎期的表达定位一致,但研究发现FOXL2对CYP19A1并没有明显的直接调控作用。(3)对雌胚CYP19A1基因表达使用的转录本研究表明,在鸡胚性腺和成年母鸡卵巢中使用相同的转录本即NCBI数据库的NM＿001001761.3,但在成年母鸡脑中CYP19A1基因表达特异使用一个不同的转录本,查阅NCBI数据库发现我们找到的这个脑启动子是以前被预测存在的转录本,即XM＿015291897.2。(4)使用JASPAR2018针对CYP19A1启动子区共预测到1045个可能调节该基因表达的转录因子;对其中11个转录因子使用双荧光素酶报告系统研究发现RUNX1、NR2F2、SP1、ESR2分别对CYP19A1启动子活性有显著的抑制作用,而RORA、CREB1、ESR1均能显著增强CYP19A1启动子活性,其中CREB1对CYP19A1启动子的促进作用最为显著。(5)分别向体外培养的前体颗粒细胞中导入CREB1和RORA超表达载体,但发现它们均不能启动细胞中的CYP19A1基因表达;结合体外培养的前体颗粒细胞CYP19A1表达量随培养时间逐步下降,我们认为可能存在来自细胞外的其他因子辅助CREB1及RORA等调控CYP19A1启动子、影响该基因表达。(6)毛猴素对体外培养的前体颗粒细胞中CYP19A1基因表达有明显的刺激作用,但在用毛猴素处理的同时超表达CREB1,CYP19A1表达量并无显著变化,其原因可能是过量的CREB1能对毛猴素的刺激作用产生负反馈抑制作用。总之,本研究发现在雌胚中CYP19A1与FOXL2共表达于前体颗粒细胞,但FOXL2并不调控CYP19A1的表达;RUNX1、NR2F2、SP1、ESR2能抑制CYP19A1启动子活性;RORA、CREB1、ESR1能增强CYP19A1启动子活性,但可能需要细胞外的其他因子辅助CREB1及RORA调控CYP19A1基因表达。