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目的类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以关节肿胀及关节压痛为特征的慢性全身性自身免疫性疾病（autoimmune disease,AID）。环状RNA（circular RNA,circRNA）是指缺乏5,末端和3,末端的共价闭合环状新型非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）,研究表明circRNA不仅可作为多种疾病早期诊断和预后判断的生物学标志物,还可进一步参与疾病发生发展过程。本研究旨在借助高通量测序技术（RNA sequencing,RNA-seq）分析RA患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中circRNA及mRNA表达谱差异,并结合生物信息学分析差异表达基因,多样本临床验证并筛选出可作为RA辅助诊断的circRNA分子标志物,进而为RA发病机制的研究奠定基础。方法临床采集4例重症RA患者（RA组）和3例健康对照者（NC组）的空腹外周血各5ml,EDTA-K2抗凝,利用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离出PBMCs,冷冻保存并送至上海烈冰生物医药科技有限公司,其使用VAHTSTM Total RNA-seq（H/M/R）构建RNA样本的cDNA文库,cDNA文库在IIIumina HiSeq TM2500上进行配对测序,检测与NC组相比,RA组PBMCs中差异表达的circRNA和mRNA。对差异表达的circRNA进行基于GO（Gene ontology）数据库的GO显著性富集分析;对差异表达的mRNA进行基于KEGG（Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomes）数据库的KEGG Pathway显著性富集分析。以明显失调的circRNA为中心构建circRNA-miRNA-mRNA分子调控网络图,展现它们之间的相互作用。从显著差异表达的circRNA中选择2条上调circRNA和2条下调circRNA,使用实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR）在32例RA患者和20例健康对照者中进行临床验证。受试者工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）分析已验证显著差异表达的circRNA对RA的检验效能。利用荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization,FISH）对目标circRNA hsacirc0000396进行定位分析。流式细胞术分选和qRT-PCR技术分析与健康对照者相比,RA患者CD3+T、CD19+B及CD56+NK细胞中hsacirc0000396的相对频率。结果RNA-seq结果显示,RA组和NC组中共有71种显著差异表达的circRNA,包括41种表达上调circRNA和30种表达下调circRNA;RA组和NC组中共有1078种显著差异表达的mRNA,包括662种表达上调mRNA和416种表达下调mRNA。GO富集分析表明,差异表达的circRNA涉及的生物过程变化主要针对NOD2信号通路等;涉及的分子功能变化则主要集中在对poly（A）核糖核酸酶的活性调控过程;细胞组成分析显示差异表达的circRNA大多参与细胞质、线粒体外膜胞质等的组成。KEGG pathway分析表明,差异表达的mRNA主要富集在TNF信号通路和NF-kappaB信号通路。CircRNA-miRNA-mRNA分子调控网络图显示差异表达的circRNA可通过与miRNA相互作用发挥调控下游靶基因作用。qRT-PCR验证结果显示hsacirc0000396和hsacirc0130438在RA组PBMCs中的表达水平显著低于NC组（P<0.05）,与测序结果一致;但hsacirc0004442和hsacirc0025887在RA组的表达量与NC组相比则无明显差异（P>0.05）。对hsacirc0000396和hsacirc0130438进行ROC曲线分析,结果显示,hsacirc0000396曲线下面积为0.809,hsacirc0130438曲线下面积为0.774,故hsacirc0000396对RA诊断具有较高的检验效能,更有潜力成为RA诊断分子标志物。故我们选择hsacirc0000396作为目标circRNA进行深入研究,荧光原位杂交技术显示与大多数的外显子circRNA一致,hsacirc0000396呈现很强的细胞浆定位。qRT-PCR结果显示,与NC组相比,RA组CD3+T细胞和CD19+B细胞中hsacirc0000396的表达量明显下降,而两组CD56+NK细胞中hsacirc0000396的表达量则无明显差异。结论证实了RA患者PBMCs中存在显著差异表达的circRNA和mRNA,这些差异表达基因涉及的通路多与炎症和转录活性有关。揭示了hsacirc0000396有望成为RA诊断的生物标志物,并可能参与T、B细胞对RA的调控作用,进而为RA诊断治疗及发病机制的研究提供新的方向。