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草菇子实体的发育大致经过以下六个阶段：针头期（Pinhead）、小纽扣期（Tiny button）、纽扣期（Button）、蛋形期（Egg）、伸长期（Elongation）和成熟期（Mature）。子实体在不同时期的生理特征变化显著，尤其是在蛋形期进入伸长期时呼吸强度开始急剧增强，子实体的形态也从未破膜的卵形变成开伞，失去商品价值。是什么原因使草菇子实体在短时间内产生这么大的变化?本研究通过细胞形态变化，激素水平变化以及特异基因的表达等方面进行了探索研究。主要研究及结果如下： 1．细胞伸长主导伸长期子实体菌柄快速伸长 显微观察草姑子实体菌柄细胞在不同发育时期以及菌柄不同部位在蛋形期和伸长期的细胞形态并测量了细胞大小变化，同时通过菌柄标记观察并测量了子实体菌柄的伸长区间。结果表明：在蛋形期草菇主要是通过细胞分裂使细胞数增加而使子实体长大，从伸长期开始，子实体菌柄伸长的主导因素是菌柄中上部细胞的伸长，同时菌柄顶部细胞的分裂起辅助作用。 2．内源激素水平变化与子实体生长显著相关 测量子实体菌柄在不同发育阶段的内源激素水平变化，结果显示：在蛋形期之前，无论促进生长类激素还是衰老类激素都没有明显的变化；但是在伸长期，促进生长类激素GA1/3和ZRs急剧上升到顶峰，衰老类激素ABA则急剧下降；到成熟期，GA1/3和ZRs的含量比伸长期时明显下降，但仍维持在较高的水平，ABA的浓度在成熟期时下降到最低水平。在不同发育时期中GA1/3的浓度变化主导GA1/3／ABA的比率变化，GA1/3／ABA可能是主导菌柄细胞生长的重要因素，但子实体进入成熟期后的衰老过程可能有其它控制衰老的生理因子起关键作用。 3．克隆到开伞阶段特异表达基因片段 通过抑制性扣除杂交法，以蛋形期子实体菌柄的Total mRNA为驱赶子，伸长期子实体菌柄的Total mRNA为目的子，克隆子实体菌柄在伸长期特异表达的基因，结果得到一个基因片段，测序并登录GENBANK进行同源性比较，没有与此序列相同的基因。以该基因片段为模板合成引物并进行基因组DNA扩增，双引物扩增到目的片段，单引物扩增得到1～2KB左右的扩增片段。 4．正、反义基因片段表达载体的构建 酶切分离克隆质粒中的目的基因片段，同时对酶切的目的表达载体进行末端平滑及去磷酸化处理，通过平末端连接，将克隆的基因片段插入到PCB载体的多克隆位点中，转化大肠杆菌，随机挑选阳性菌落，提取质粒进行测序，证实获得分别具有正反序列的克隆载体。