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前期研究发现聚乙烯亚胺(PEI)接枝琼脂糖介质的离子交换容量(IC)高于临界IC(cIC)时,接枝的PEI链配基可提供三维吸附空间和“链传递”作用,使其具有较高的吸附容量和快速的传质速率。本文在前人研究的基础上针对表面配基和反离子对PEI接枝介质吸附蛋白质行为的影响开展了进一步的研究。首先利用二乙胺基乙基(DEAE)和PEI对基础介质Sepharose FF进行表面修饰,合成三类阴离子交换层析介质,即FF-D(只有表面配基DEAE)、FF-PEI(只有接枝链配基PEI)、FF-D-PEI(同时含有表面和接枝链配基),系统研究表面配基与接枝链配基在FF-D-PEI接枝介质中的作用。结果发现,PEI接枝链配基密度不同时,表面配基对介质吸附性能的影响不同:接枝链配基密度适中时(接近cIC),即400<IC≤600mmol/L,表面配基可显著提高传质速率;而当链配基密度过高或过低时,表面配基对传质的促进作用均较小。该结果表明表面配基与接枝链配基共同影响PEI接枝介质中蛋白质传质,这可能是由于接枝量不同时,接枝层存在的状态不同,相邻PEI链间距不同,因而分布在相邻链之间的表面配基可发挥的作用不同。只有当PEI链配基的IC值接近cIC时,PEI链呈现较伸展的形态,且相邻PEI链间距离较近,表面配基可作为相邻链间的传质中转站,从而大幅度促进链传递作用的发生。另外,前期研究发现,将FF-PEI-L680(IC>cIC)中PEI链进行部分电荷中和修饰后获得的FF-PEI-R440介质,吸附和洗脱性能均有较大提升,但反离子的作用尚不清楚。因此,本文研究了反离子对该减电荷介质的蛋白质层析行为的影响。结果发现,反离子明显影响FF-PEI-R440的吸附平衡、传质速率和动态吸附容量,而不影响洗脱行为,且流动相中选择Cl~-为反离子最利于FF-PEI-R440的实际柱层析操作。这与反离子对FF-PEI-L680的影响结果不同,说明反离子对介质的影响不但依赖于离子交换基团的化学性质,也与介质的电荷密度有关。上述研究结果对推动高效蛋白质制备层析的吸附理论和应用技术发展具有重要的意义。