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[背景和目的]壳寡糖硬脂酸嫁接物纳米材料(stearic acid grafted chitosan oligosaccharide nanomicelles, CSO-SA)是由浙江大学药学院药物制剂研究所研制合成。CSO-SA是利用壳聚糖(CSO)分子结构中的氨基与硬脂酸(SA)上的羧基经过偶联反应,形成两亲性的聚合物胶团。CSO-SA具有高生物相容性、可体内降解、靶向性佳、缓释可控等符合新型药物载体需要的特性,因此有望用于包载生物大分子,作为药物载体材料。我们课题组前期研究结果表明CSO-SA存在一定程度的肺部毒性、遗传毒性等。免疫毒性作为敏感的毒性指标,是药物非临床安全性评价的一项重要内容。本实验将根据美国国家毒理学项目(National Toxicology Program, NTP)推荐的小鼠免疫毒性检测方案(USNTP,1988),从免疫病理、体液免疫、细胞免疫、非特异性免疫四个方面初步评价CSO-SA对小鼠的免疫毒性。[方法]实验用30只C57雄性小鼠,每组6只,分为CSO-SA(0、3.6、9、18mg/kg)剂量组和环磷酰胺(CTX)阳性对照组。连续腹腔注射处理28天后,股动脉放血处死小鼠。分析小鼠体重增量和免疫器官的脏器指数；检测血常规、外周血中T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T淋巴细胞比例；血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平；用MTT法测定NK细胞活性；HE染色后经光镜观察组织病理学改变,透射电镜(TEM)观察细胞超微结构。[结果]1.一般情况观察CSO-SA处理后,日常观察发现小鼠活动度下降,消瘦等表现,高剂量(18mg/kg)组表现尤其明显。2.体重增量与脏器系数变化结果CSO-SA反复处理可抑制小鼠生长,9、18mg/kg组的小鼠体重增长比阴性对照组显著降低(P<0.05)。9、18mg/kg组小鼠脾脏脏器系数显著高于阴性对照组(P<0.05)。9mg/kg组的小鼠胸腺脏器系数显著高于阴性对照组(P<0.05)。3.免疫器官组织病理学HE染色观察发现CSO-SA反复处理后脾小体结构紊乱,白髓萎缩,红髓扩张；胸腺皮质区变薄,髓质区扩增,皮髓质接合处分界不清。电镜观察脾脏和胸腺的超微结构发现,淋巴细胞线粒体变得肿胀,还伴有空泡化现象。4.血常规分析血常规结果显示CSO-SA反复染毒处理后,阳性对照组各指标与阴性对照组相比均存在显著性差异(P<0.05)。9、18mg/kg组中性粒细胞百分比(NE%)与阴性对照组相比显著升高(P<0.05)。9、18mg/kg组淋巴细胞百分比(LY%)与阴性对照组相比显著降低(P<0.05)。18mg/kg组红细胞计数(RBC)和血红蛋白含量(HGB)与阴性对照组相比显著下降(P<0.05)。5.小鼠外周血中T淋巴细胞亚型分析CSO-SA反复染毒处理后,各剂量组CD4+T细胞相对百分比,CD8+T细胞相对百分比与生理盐水阴性对照组相比,未观察到显著性差异(P>0.05)。6.血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG水平CSO-SA反复染毒处理后,3.6mg/kg组小鼠IgM水平与阴性对照组相比显著升高(P<0.05)。7.NK细胞活性检测结果CSO-SA反复染毒处理后,18mg/kg组NK细胞活性与阴性对照组相比显著降低(P<0.05)。[结论]本实验条件下,反复腹腔注射不同浓度(3.6、9、18mg/kg)CSO-SA会对小鼠造成一定程度的免疫毒性,18mg/kg剂量下可明显引起胸腺和脾脏的病理改变,导致NK细胞活性显著下降。