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目的 薯蓣丸出自《金匮要略·血痹虚劳病》,即“虚劳诸不足,风气百疾,薯蓣丸主之”,在《千金方》、《外台秘要》、《和剂局方》等名著中均有该方疗诸虚百损的记载。近年来,临床用于治疗慢性肾炎、肺结核、白内障、十二指肠溃疡、嗜酸性粒细胞增多症、脱肛、慢性荨麻疹、类风湿性关节炎、神经官能症、周围神经麻痹、重症肌无力、贫血、体虚感冒、产后腰髋疼痛等多种慢性虚弱病症,取得了满意的效果。本课题旨在探讨薯蓣丸对机体免疫功能的影响,为经方防治应激性免疫抑制研究开辟一条新途径,并为开发薯蓣丸作为调节免疫功能药物提供客观依据。同时在应激的中医药治则理论、复方免疫药理的现代研究方面均具有一定的实践意义。 方法 通过文献研究考察薯蓣丸现代研究概况以及中医药与应激免疫的关联。并以此为基础,通过实验初步揭示薯蓣丸对创伤应激小鼠免疫功能的影响及其机制,具体方法如下: 1、薯蓣丸对创伤应激小鼠胸腺的形态学研究,系采用光学显微镜和透射电镜观察小鼠胸腺组织形态改变,并用电子天平检测中枢免疫器官质量指数变化。 2、运用细胞培养和生物化学方法测定薯蓣丸对创伤应激小鼠脾淋巴细胞增殖及IL-2生物活性的影响。 3、采用ELISA法检测薯蓣丸对创伤应激小鼠脾细胞及外周血IL-2浓度的影响。 4、采用免疫组化方法观察薯蓣丸对创伤应激小鼠肝细胞HSP70表达的影响。 5、采用荧光定量PCR方法检测薯蓣丸对创伤应激小鼠脾脏中IL-2mRNA、IL-2RmRNA表达情况的影响。 结果 1、发现截肢应激可导致小鼠胸腺指数显著减小,与正常对照组比较有显著差异(P<0.01),薯蓣丸加应激组胸腺指数与正常组无显著差异(P>0.05),形态学上对比应激组,薯蓣丸加应激组胸腺组织的亚细胞结构变化得到改善,与正常组接近。 2、薯蓣丸加应激组小鼠脾脏淋巴细胞增殖功能、IL-2生物活性显著增强,与应激对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。 3、薯蓣丸加应激组小鼠脾脏和外周血的IL-2浓度与应激对照组比较,有非常显著性差异(P<0.01)。 4、小鼠肝细胞的HSP70表达强度呈如下趋势:薯蓣丸加应激组>应激对照组>正常对照组,各组之间有显著差异(P<0.05)。伙预几时创伤!衍丫放小鼠兔设功能影响的实验叫笼‘l负卜厂f。论文 5、薯箱丸体内应用对创伤应激小鼠IL一ZmRNA及lL一ZRmRNA水平均具有显著的升高作用,薯栽丸加应激组与应激对照组、正常对照组有显著性差异(P<0 .05)。结论 !、薯预丸加应激组小鼠胸腺小叶结构清晰,皮质厚,淋巴细胞多,发育良好,并多见细胞分裂相,说明小鼠胸腺内分泌功能活跃,新陈代谢旺盛,同时薯栽丸加应激组胸腺质量指数与正常组无显著差异,其组织学变化与正常对照组小鼠的组织学特征也一致,反映出薯预丸(汤)抗应激作用,可有效预防因创伤应激引起的中枢免疫器官胸腺的形态学改变。 2、实验说明扶正祛邪方薯预丸对应激小鼠免疫细胞功能有调整作用,初步认为薯预丸可对抗应激后小鼠脾淋巴细胞受抑状态,增加IL一2活性,从而缓解和降低应激对机体的不利影响。提示如果机体处于应激免疫抑制或免疫功能下降状态,可口服薯预丸(汤)改善免疫功能。 3、实验提示薯筱丸(汤)对应激小鼠免疫细胞功能有调整作用,初步认为薯筱丸(汤)升高了外周血和脾脏IL一2浓度,从而作用不同的效应器官,发挥非特异性免疫功能,缓解和降低了应激对机体的不利影响。提示口服薯孩丸(汤)可促进脾脏细胞及外周血中IL一2的分泌。 4、实验结果表明应激对照组机体所受损更严重,HSP7。的高强度表达作为评价组织细胞所处危险性的生物标志有着重要意义,创伤应激可作为独立因素使肝细胞中HSP7。表达增强,而薯预丸干预使HSP7。表达进一步加强,所以薯预丸的免疫调节作用机制之一可能在于HSP7。的表达变化,这构成了与细胞损害的修复及免疫系统调节的关联,虽然作用是非特异性的,但这一免疫分子的变化在应激中发挥着重要作用,这也许是薯领丸抗应激免疫抑制的机理之一,可以考虑薯预丸(汤)作为抗应激损害的辅助用药。 5、实验发现口服薯预丸(汤)对创伤小鼠IL一ZmRNA及IL一ZRInRNA水平均具有明显的升高作用,提示薯预丸可通过促进创伤小鼠淋巴细胞IL一2及IL一ZR的基因转录表达进而逆转IL一2及IL一ZR的抑制状态。这可能是薯接丸纠正创伤后细胞免疫功能低下的作用机理之一。主题词 创伤和损伤/中医药疗法 应激/免疫学 实验研究 @薯孩丸