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目前,由ASSVd(Apple scar skin viroid,ASSVd)引起的苹果花脸病在中国苹果主产区已上升为主要病害,通常染病植株果实呈花脸状或锈果状、果实口感变差,使果实的商品价值下降,给苹果生产带来了严重的经济损失。目前,针对该病害,有效的防治药剂鲜有报道。苹果作为中国重要的经济作物,人们对果实品质要求日渐升高。随着果树栽培面积的不断增加,种植年限的延长,受栽培管理和全球气候变化的影响,苹果花脸病日益严重,急需找到有效防治花脸病的方法,有助于缓解中国苹果单产低、品质差的问题。
为了缩短ASSVd防控药剂筛选的周期,提高初筛的效率,首先,在温室进行了ASSVd指示植物的筛选;选择易种植、易接种、症状明显的指示植物进行ASSVd防治药剂的初筛;然后,通过田间试验,测试药剂对花脸病症状的缓解作用、对植株体内ASSVd增殖的抑制作用以及对果实品质的影响3个指标来评价药剂的防治效果。期望能够筛选出对苹果花脸病有防治作用的药剂,为田间该病害的有效防治提供借鉴。主要研究结果如下:
1、ASSVd指示植物的筛选
采用摩擦接种的方法,将带有ASSVd的病组织粗提液接种5科15种草本植物,通过RT-PCR检测、症状观察进行统计,结果表明,ASSVd可以侵染油菜、黄瓜、扁豆角、蚕豆、昆诺藜、长豆角和苋色藜共计7种草本植物。其中在油菜病毒接种成功率最高,达到80‰其次是黄瓜,达到了77.78%,其它寄主的接种成功率较低,均在50%以下。除昆诺藜、苋色藜为局部侵染,其它指示植物均为系统侵染。在油菜上系统叶表现为凹凸不平,在黄瓜上系统叶表现为皱缩畸形,这2种供试寄主症状最为明显。其余寄主叶片褪绿现象严重。将发病植株组织粗提液转接到健康植株,症状表现与第一次相同,且RT-PCR扩增得到了相同的ASSVd全基因组序列。2、温室中ASSVd抑制药剂的筛选
选择长势一致的4叶期黄瓜和油菜植株,先喷施药剂,包括6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂(商品名为阿泰灵)、五倍子提取物、“37”、“1318”、“M”和“J”6种药剂,2d后接种ASSVd,待只接种病毒的对照表现出明显病毒症状,发病率达到80%后,进行症状调查,结果表明,五倍子提取物100×液、“M”150×液病情指数均显著低于清水对照,防效相对最高,在45%左右。
选择长势一致的4叶期黄瓜和油菜植株,先接种ASSVd,2d后喷施6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂、五倍子提取物、“37”、“1318”、“M”和“J”6种药剂,对照表现出明显病毒症状,发病率达到80%后,进行症状调查,结果表明多数药剂的病情指数显著低于清水对照,6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂1000×液、“1318”150×液、“37”150×液在黄瓜和油菜上防效相对较高,防效在60%左右。3、苹果花脸病防控药剂的田间防治效果
将上述6种药剂在唐山卧龙谷(下面简称“唐山果园”)、保定顺平(下面简称“顺平果园”)及保定市莲池区河北农业大学试验园(下面简称“农大果园”)进行了田间防治试验,从对花脸病症状的缓解作用、对植株体内ASSVd增殖的抑制作用以及对果实品质的影响3个指标来评价药剂的防治效果。
通过田间调查,发现在唐山果园对苹果花脸病防治效果最好的是花期施用“37”150×液,防效达到了83.60%,其次是根施结合叶施6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂1000×液,防效为73.83%;在顺平的试验结果表明,防治效果较好的是花期施用“1318”150×液,防效达到了33.47%,其次是花期施用“37”150×液,防效为26.21%;河北农大的试验结果表明,防治效果较好的是根施结合叶施五倍子提取物100×液,防效达到了42.83%,其次为花期施用五倍子提取物100×液,防效为42.27%。
利用RT-qPCR技术测试几种药剂对植株体内ASSVd增殖的抑制作用,结果表明,在唐山果园,花期施用“1318”150×液对ASSVd增殖的抑制作用最强,其次是花期施用“37”150×液;在顺平果园,花期施用“37”150×液对ASSVd增殖的抑制作用最强,其次是“1318”150×液;在农大果园,根施结合叶施6%寡糖,链蛋白可湿性粉剂1000×液对ASSVd增殖具有一定的抑制作用。
通过对果实品质的测试,发现顺平果园花期施用“1318”150×液,果实可溶性固形物含量最高,达到16.91%,是对照的1.22倍;花期施用“M”150×液,果树平均单果重量、果肉硬度分别达到192.86g、5.73kg/cm2,是对照的1.28倍、1.68倍。各药剂处理对果实品质的其它指标无影响,且其它药剂对果实品质均没有明显的影响。
为了缩短ASSVd防控药剂筛选的周期,提高初筛的效率,首先,在温室进行了ASSVd指示植物的筛选;选择易种植、易接种、症状明显的指示植物进行ASSVd防治药剂的初筛;然后,通过田间试验,测试药剂对花脸病症状的缓解作用、对植株体内ASSVd增殖的抑制作用以及对果实品质的影响3个指标来评价药剂的防治效果。期望能够筛选出对苹果花脸病有防治作用的药剂,为田间该病害的有效防治提供借鉴。主要研究结果如下:
1、ASSVd指示植物的筛选
采用摩擦接种的方法,将带有ASSVd的病组织粗提液接种5科15种草本植物,通过RT-PCR检测、症状观察进行统计,结果表明,ASSVd可以侵染油菜、黄瓜、扁豆角、蚕豆、昆诺藜、长豆角和苋色藜共计7种草本植物。其中在油菜病毒接种成功率最高,达到80‰其次是黄瓜,达到了77.78%,其它寄主的接种成功率较低,均在50%以下。除昆诺藜、苋色藜为局部侵染,其它指示植物均为系统侵染。在油菜上系统叶表现为凹凸不平,在黄瓜上系统叶表现为皱缩畸形,这2种供试寄主症状最为明显。其余寄主叶片褪绿现象严重。将发病植株组织粗提液转接到健康植株,症状表现与第一次相同,且RT-PCR扩增得到了相同的ASSVd全基因组序列。2、温室中ASSVd抑制药剂的筛选
选择长势一致的4叶期黄瓜和油菜植株,先喷施药剂,包括6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂(商品名为阿泰灵)、五倍子提取物、“37”、“1318”、“M”和“J”6种药剂,2d后接种ASSVd,待只接种病毒的对照表现出明显病毒症状,发病率达到80%后,进行症状调查,结果表明,五倍子提取物100×液、“M”150×液病情指数均显著低于清水对照,防效相对最高,在45%左右。
选择长势一致的4叶期黄瓜和油菜植株,先接种ASSVd,2d后喷施6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂、五倍子提取物、“37”、“1318”、“M”和“J”6种药剂,对照表现出明显病毒症状,发病率达到80%后,进行症状调查,结果表明多数药剂的病情指数显著低于清水对照,6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂1000×液、“1318”150×液、“37”150×液在黄瓜和油菜上防效相对较高,防效在60%左右。3、苹果花脸病防控药剂的田间防治效果
将上述6种药剂在唐山卧龙谷(下面简称“唐山果园”)、保定顺平(下面简称“顺平果园”)及保定市莲池区河北农业大学试验园(下面简称“农大果园”)进行了田间防治试验,从对花脸病症状的缓解作用、对植株体内ASSVd增殖的抑制作用以及对果实品质的影响3个指标来评价药剂的防治效果。
通过田间调查,发现在唐山果园对苹果花脸病防治效果最好的是花期施用“37”150×液,防效达到了83.60%,其次是根施结合叶施6%寡糖·链蛋白可湿性粉剂1000×液,防效为73.83%;在顺平的试验结果表明,防治效果较好的是花期施用“1318”150×液,防效达到了33.47%,其次是花期施用“37”150×液,防效为26.21%;河北农大的试验结果表明,防治效果较好的是根施结合叶施五倍子提取物100×液,防效达到了42.83%,其次为花期施用五倍子提取物100×液,防效为42.27%。
利用RT-qPCR技术测试几种药剂对植株体内ASSVd增殖的抑制作用,结果表明,在唐山果园,花期施用“1318”150×液对ASSVd增殖的抑制作用最强,其次是花期施用“37”150×液;在顺平果园,花期施用“37”150×液对ASSVd增殖的抑制作用最强,其次是“1318”150×液;在农大果园,根施结合叶施6%寡糖,链蛋白可湿性粉剂1000×液对ASSVd增殖具有一定的抑制作用。
通过对果实品质的测试,发现顺平果园花期施用“1318”150×液,果实可溶性固形物含量最高,达到16.91%,是对照的1.22倍;花期施用“M”150×液,果树平均单果重量、果肉硬度分别达到192.86g、5.73kg/cm2,是对照的1.28倍、1.68倍。各药剂处理对果实品质的其它指标无影响,且其它药剂对果实品质均没有明显的影响。