【摘 要】
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目的:近年来,研究者们发现微生物多糖的多种生物活性。其抗氧化活性已应用在食品,化妆品等领域。在医药领域,抗氧化剂主要来源于动物和植物中提取的多糖,由于生产周期长,得率低,已经不能满足需求。微生物多糖比植物多糖和动物多糖产率高,提取容易,生产周期短,短时间能够得到大量产物,作为天然抗氧化剂的来源,有很大的开发和应用潜力。本研究以西北大学应用微生物实验室保存的一株细菌BY为研究对象,提取胞外多糖并在化
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目的:近年来,研究者们发现微生物多糖的多种生物活性。其抗氧化活性已应用在食品,化妆品等领域。在医药领域,抗氧化剂主要来源于动物和植物中提取的多糖,由于生产周期长,得率低,已经不能满足需求。微生物多糖比植物多糖和动物多糖产率高,提取容易,生产周期短,短时间能够得到大量产物,作为天然抗氧化剂的来源,有很大的开发和应用潜力。本研究以西北大学应用微生物实验室保存的一株细菌BY为研究对象,提取胞外多糖并在化学方法层面和细胞层面研究它的抗氧化活性,以期作为潜在的抗氧化药物辅助治疗疾病提供参考。方法:通过16 Sr RNA进行菌株鉴定;水提醇沉提取BY菌株胞外多糖(EPS),进行定性定量分析并测定其自由基清除能力;柱层析进一步分离纯化,分析EPS2的单糖组成,分子量以及官能团组成;通过ELISA检测EPS2对心肌细胞H9C2和人脐静脉内皮细胞HUVEC内MDA,LDH,SOD含量的影响;并以H2O2为氧化应激诱导模型,H9C2心肌细胞为氧化应激损伤模型,通过荧光染色,检测EPS2对H9C2凋亡,ROS水平和线粒体膜电位影响,通过WB检测凋亡相关蛋白表达情况。结果:1、BY细菌为G-菌,类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp.);EPS的Molish反应,碘-淀粉反应,微量紫外光谱分析为多糖物质;总糖含量为63.4%,蛋白质含量为1.5%,糖醛酸含量为1.9%,不含硫酸根离子;在浓度为0-10 mg/ml时对ABTS+自由基,超氧阴离子(O2-)自由基具有清除能力,能够螯合亚铁离子,具有还原能力且有浓度依赖性。2、DEAE纤维素柱层析出现两个峰,分别为中性糖(EPS1)和酸性糖(EPS2)。EPS2的重均分子量为398.4 KDa,单糖组成为Fuc(0.466%),Rha(0.110%),Ara1(1.019%),Gal(21.755%),Glc(33.815%),Xyl(0.983%),Man(25.557%),Gal UA(12.925),Glc UA(3.368);傅里叶红外光谱出现了多糖的两个特征峰。3、H2O2能够引起H9C2心肌细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC内MDA,LDH含量升高,SOD含量降低,EPS2可以降低MDA,LDH含量,升高SOD水平。4、与H2O2诱导组相比,加入EPS2组的Hoechest 33258染色细胞核荧光强度减弱,ROS水平下降,线粒体膜电位升高,Bax蛋白和Cleaved caspase-3蛋白表达量下降,Bcl-2蛋白表达量升高。结论:以上结果表明,BY菌株产生的胞外多糖具有抗氧化活性;酸性糖组分EPS2能通过抑制相关凋亡蛋白的表达,对H9C2心肌细胞氧化应激损伤起保护作用,这为微生物胞外多糖作为天然抗氧化剂用于辅助治疗疾病提供了思路。
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