荧光假单胞菌W3胞外蛋白酶对UHT乳品质的影响

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低温条件下原料乳中以乳酸菌为主的嗜温微生物生长受到抑制,但是污染的嗜冷菌可以在低温条件下持续繁殖并逐渐成为牛乳中的主要微生物。目前从原料乳中分离出来的最常见的嗜冷菌为荧光假单胞菌,其菌体虽然能被UHT(超高温瞬时灭菌)处理杀死,但是它们在低温下产生的蛋白酶具有很强的耐热性,经过UHT处理后依然能保留一定的活性并在贮藏过程中降低UHT乳的品质从而缩短货架期。本论文以原料乳中的优势嗜冷菌——荧光假单胞菌W3为研究对象,采用硫酸铵沉淀提取W3分泌的胞外蛋白酶,进而对酶学性质进行了研究,结果发现该酶最适温度和pH分别为40℃和8.5;Ca2+和Mn2+促进酶活,Cu2+、EDTA和DTT抑制酶活,这表明蛋白酶含有二硫键且活性中心可能含有Ca2+。测定酶动力学参数发现,蛋白酶的Vmax值为13.947 U/mL和Km值为13.647 mg/mL,表明该酶较易与底物结合。分析蛋白酶的耐热性发现,65℃加热30 min后,全脂乳和脱脂乳中的残留酶活分别为64.25%和58.20%;137℃加热5 s后,全脂乳和脱脂乳中的残留酶活分别为51.53%和41.13%,表明乳成分对蛋白酶活具有一定的保护作用。将经硫酸铵沉淀提取的蛋白酶加入UHT乳中于40℃观测30 h,通过SDS-PAGE发现蛋白酶最先水解κ-酪蛋白,其次为β-酪蛋白,最后是α-酪蛋白,对β-乳球蛋白和α-乳清蛋白几乎没有水解,表明蛋白酶主要水解酪蛋白。研究UHT乳的理化性质发现,随时间的增加,UHT乳的颜色逐渐加深、粒度变大、Zeta电位绝对值减小、黏度增大、酸度增加、沉积物含量升高和水化值降低。测定UHT乳的质构发现,UHT乳的硬度、粘聚性和黏附性指数随时间的增加而增大,表明蛋白酶对UHT乳的品质产生了负面影响。利用Arrhenius方程建立UHT脱脂乳和全脂乳在37℃、25℃和4℃下的货架期预测模型,以筛选得到的蛋白水解度为限制性指标,确定了当原料乳中污染的嗜冷菌数达103 CFU/mL时,其对应的蛋白酶活约为0.50 U/mL,在该条件下UHT脱脂乳的货架期预测方程为:(?);UHT全脂乳为:(?),利用该方程计算得到UHT脱脂乳在25℃贮藏时的货架期为165 d;UHT全脂乳为150 d,并于37℃初步验证了预测模型的可靠性。
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