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背景与目的肺癌是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。近年来发病率明显增高,是我国恶性肿瘤致死的主要原因。肺癌早期多无明显症状,大多数患者就诊时已是肺癌中晚期,从而失去手术治疗的机会,因而安全有效的化学治疗措施显得尤为重要。多烯紫杉醇（Docetaxel,DTX）是从红豆杉中提取的一种二萜类化合物,因其可以延缓微管解聚成亚单位,形成稳定的非功能性微管束,从而抑制细胞分裂和细胞增殖,诱导细胞发生凋亡,发挥其独特的抗癌活性,广泛应用于肺癌、胃肠癌、乳腺癌等的治疗中。然而化疗药物的应用容易出现一些不良反应,如常见的恶心、呕吐等消化道反应,较严重的不良反应是中性粒细胞减少、发热性中性粒细胞减少症等。中性粒细胞作为机体的守护屏障,其数量的减少直接导致人体免疫功能下降,对化疗药物耐受差,影响治疗效果。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,gm-csf）可增强巨噬细胞的mhc-ii表达,促进造血干细胞的增殖分化作用,从而发挥刺激粒细胞的功能。与化疗药物同用,可显著增强后者的抑瘤作用,同时减少不良反应,减轻身体耐受,增强患者机体抵抗力。胸腺肽α1（thymosinα1,tα1）可促进cd8+t细胞成熟,控制免疫细胞发挥作用,对靶细胞产生相关生物学效应,从而减轻化疗药物对细胞的氧化损伤作用。本研究着重探讨gm-csf和tα1联合dtx对lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。方法根据实验需要分为细胞实验和动物实验两部分。细胞实验主要检测dtx对lewis肺癌细胞生长的抑制作用,动物实验通过建立小鼠lewis肺癌移植瘤模型,结合化疗药物的应用来观察用药后小鼠体质量、瘤质量及外周血指标的变化及肿瘤的脏器转移情况。1、细胞实验:通过不同浓度的dtx作用于lewis肺癌细胞,来检测dtx对lewis肺癌细胞的抑制率,绘制剂量-效应曲线。2、动物实验:c57bl/6小鼠随机分为5组,接种肿瘤,建立小鼠lewis肺癌移植瘤模型。dtx20mg/kg,腹腔注射,每周三次。tα110mg/kg,皮下注射,每周两次。gm-csf20ug/kg,皮下注射,每周两次。3、检测指标用药后观察荷瘤小鼠生活状态,并对小鼠体质量、瘤体大小及外周血细胞常规进行测定,每周三次。化疗结束后眼球取血进行血清细胞因子、外周血t细胞亚群检测,处死小鼠后取出胸腺和脾脏,进行胸腺指数、脾脏指数、小鼠脾脏t细胞、b细胞增殖能力及脾脏组织学检查。结果1、dtx对lewis肺癌细胞生长的抑制作用lewis肺癌细胞存活率随着dtx浓度的增加而下降,dtx对lewis肺癌细胞的半数抑制浓度（ic50）为5×10-10mol/l。2、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠体质量、抑瘤率的影响所有药物化疗组小鼠的体质量明显低于空白对照组,dtx+tα1组、dtx+gm-csf组、dtx+tα1+gm-csf组体质量低于空白对照组,但高于单纯用dtx组。单纯用dtx药物组瘤质量低于空白对照组,抑瘤率为34%,dtx+tα1组和dtx+gm-csf组瘤质量显著低于空白对照组,抑瘤率分别为46%和48%,dtx+tα1+gm-csf组抑瘤率为65%,有极显著差异。3、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠胸腺质量、胸腺指数和脾脏质量、脾脏指数的影响所有药物化疗组小鼠的胸腺质量、胸腺指数和脾脏质量、脾脏指数极显著低于空白对照组（p<0.01）,dtx+tα1+gm-csf组该项指标明显高于单用dtx组（p<0.05）。4、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠脾脏的组织形态的影响he染色切片上可见脾脏淤血,脾实质白髓、红髓结构不清晰,脾小体结构不完整。脾窦扩张,窦内网状细胞增生,可见少量残存淋巴滤泡,其间大量肿瘤细胞呈散在、簇状、或小团状排列,细胞多呈裸核样,核深染,核型不规则,大小较一致。5、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠脾脏t细胞、b细胞增殖能力的影响所有药物化疗组的t细胞、b细胞刺激指数极显著低于空白对照组（p<0.01）,dtx+tα1+gm-csf组该项指标高于单纯用dtx药物组（p<0.05）。6、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠外周血白细胞的影响用药后dtx药物组白细胞数量明显下降,低于空白对照组。dtx+tα1组白细胞数量稍高于正常组,dtx+gm-csf组白细胞数量显著高于正常组,dtx+tα1+gm-csf组白细胞数量增高最明显。说明gm-csf可显著增加白细胞数量,拮抗dtx化疗引起的白细胞减少症。7、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠血清细胞因子的影响dtx+tα1组、dtx+gm-csf组、dtx+tα1+gm-csf组il-1、il-2、il-4、il-6、tnf-α、ifn-γ含量显著低于空白对照组（p<0.05）,高于单纯用dtx药物组,尤以dtx+tα1+gm-csf组差异极显著（p<0.01）。8、gm-csf、tα1对dtx化疗小鼠外周血t细胞亚群的影响各用药组的cd3+cd4+、cd3+cd8+t细胞数量、cd4+/cd8+比例均较空白对照组低,而dtx+tα1+gm-csf组该数值高于单纯用dtx组。说明dtx引起体内CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞数量减少,而Tα1、GM-CSF可增加CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞数量。结论:Tα1、GM-CSF联合DTX共同作用,可有效抑制肿瘤生长,同时增强机体抵抗力。拮抗DTX化疗时产生的体重下降、脾脏、胸腺质量下降,减少DTX对T细胞和B细胞的损伤作用,拮抗化疗产生的中性粒细胞减少和血清因子IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ的减少,增强外周血中T淋巴细胞的数量及功能,从而诱导细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞免疫,发挥机体杀伤肿瘤细胞的免疫调节作用。Tα1、GM-CSF联合DTX共同作用,效果更佳。