桑叶有效部位制备与化学成分定性研究

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近些年来,国内外有关学者在积极研究天然、保健、安全的药食两用植物,而桑叶正属于此研究范围。桑叶始载于《神农本草经》,为桑科植物桑Morus alba L.的干燥叶。本品性寒、味甘苦,具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功能,是常用中药之一。现代研究表明桑叶具有降血糖,降血脂、抗粥样硬化、抗炎抗衰老,抗病毒等药理作用。本文以桑叶作为研究对象,提取纯化得到了桑叶总酚和总生物碱两个有效部位。通过查阅相关文献,优化出从桑叶中提取纯化得到总酚和总生物碱的最佳工艺参数。这对研制出新型中药治疗糖尿病药物有着重要的应用价值。基于此,所做工作如下:1,用四种方法对桑叶提取溶剂和提取方式进行了筛选,碱水回流和碱水渗漉提取液中芦丁含量很低,醇提取液中芦丁和绿原酸含量大于水提液中两倍以上。利用正交实验法筛选出最佳提取工艺,实验结果表明,最佳提取条件为:加70%乙醇量12倍与10倍、提取两次、提取时间2小时。2,对常用的两种型号阳离子树脂进行了比较,732型阳离子树脂DNJ转移率较高,但是重复使用的效果极差,而D001型树脂重复使用效果很好;通过单因素实验筛选出桑叶中总生物碱最佳纯化参数:所用阳离子树脂为D001,最佳树脂量为1.2BV。阳离子树脂吸附洗脱最佳参数为:上样流速10mL/min,树脂溶胀时间9小时,氨水洗脱浓度2%,洗脱体积4BV。阴离子树脂吸附洗脱最佳参数为树脂量2BV。三次实验结果表明DNJ含量x±s为(25.8±1.5)%,工艺稳定性良好。且DNJ纯度较高。3,通过静态与动态吸附从8种大孔树脂中筛选出AB-8作为桑叶总酚的吸附树脂通过单因素实验筛选出桑叶中总酚最佳纯化参数:一次大孔树脂工艺参数:大孔树脂型号为AB-8,上样pH 2.0,药液浓度0.25g.mL-1,上样量0.8BV,0.5%氨水洗脱体积3BV;大孔树脂二次吸附洗脱最佳参数为上样量1.25BV、50%乙醇洗脱体积3BV。三次实验结果表明总酚含量x±s为(52±1.5)%,工艺稳定性良好,得到桑叶总酚纯度较高。4,采用HPLC-ESI-MS对桑叶总酚部位的主要化学成分进行了定性分析。采用HPLC-ESI-MSn联用技术,通过质谱断裂和紫外吸收光谱等途径初步鉴定了桑叶总酚部位中的主要的12个化合物:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酰莽草酸(同分异构体)、芦丁、异槲皮苷、槲皮素-3-0-(6”-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖、山奈酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、山奈酚-3-O-(6"-O-乙酰基)-p-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素和山奈酚。5,采用UPLC-ESI-MS对桑叶总生物碱部位的主要化学成分进行了定性分析。采用UPLC-ESI-MS联用技术,通过质谱数据和对照品比对等途径初步鉴定了桑叶生物碱部位中的主要的4个化合物:2-O-β-Glc-DAB、DNJ、荞麦碱和N-甲基-1-DNJ。6,通过中试放大实验验证了实验室小试工艺的稳定性,按照实验室小试工艺流程和参数进行放大,中试桑叶用量10Kg,结果中试实验所得总酚干浸膏得率总体在14‰以上,总酚纯度大于50%;总生物碱干浸膏得率总体为1.5‰以上,DNJ纯度大于26%。结果表明中试所得桑叶总酚和总生物碱纯度较高,工艺稳定性好。
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