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目的:研究小鼠单纯疱疹性角膜基质炎发生和发展过程中白细胞介素21(IL-21)在角膜组织中的表达水平,探讨IL-21的表达与单纯疱疹性角膜基质炎疾病程度之间的关系。
方法:用单纯疱疹病毒-1(HSV-1)接种于BALB/c鼠角膜上建立单纯疱疹性角膜基质炎(HSK)动物模型,分别于接种病毒前和接种病毒后的第1d、3d、7d、14d、21d及28d收集小鼠角膜。免疫荧光:制作小鼠角膜冰冻切片后用激光扫描共聚焦显微镜检测角膜中IL-21的表达,实时荧光定量(Real-time)PCR的方法检测小鼠角膜中IL-21mRNA的表达,同时,在显微镜下观察小鼠角膜的临床变化,组织学检查角膜的病理改变。采用Kruskal-Wills检验,Nemenyi法检验及Spearson相关分析进行统计学分析,以P<0.05作为差异有统计学意义。
结果:
1、HSV-1感染小鼠的角膜后,82%(37/45)的小鼠自病毒接种后第7d起开始出现角膜基质混浊,接种后第14d角膜基质完全混浊,混浊的高峰时间为病毒感染后第14-21d,91%(41/45)的小鼠均患上了角膜基质炎,28d时开始修复。接种后第14d,组织病理学显示角膜基质层高度水肿、增厚,角膜基质内大量的炎性细胞浸润,新生血管增生。
2、免疫荧光:IL-21表达于角膜基质层炎性细胞的细胞膜及细胞浆中,表现为较强的红色荧光,而正常小鼠角膜基质层未检测到红色荧光。
3、Real-time PCR数据显示:IL-21mRNA在正常角膜组织及接种HSV-1角膜组织中均有表达,接种HSV-1后1d小鼠角膜中IL-21mRNA表达量达到高峰(3.93士0.30),约为正常小鼠角膜的3.93倍,接种HSV-1后21d小鼠角膜中IL-21mRNA表达量最低(1.31士0.05),约为正常小鼠角膜的1.31倍。接种HSV-1后1d,3d,7d,14d角膜中IL-21mRNA相对表达量与0d相比有明显统计学差异,21d和28d角膜中IL-21mRNA基因相对表达量与0d相比无统计学差异。角膜平均混浊程度与IL-21mRNA表达量呈负相关。
结论:IL-21表达于单纯疱疹病毒性角膜基质炎(HSK)小鼠角膜基质层炎症细胞的细胞膜及细胞浆中;感染早期IL-21mRNA在角膜组织中的表达量明显增加,随着角膜混浊程度的加重IL-21mRNA的表达量减少,IL-21参与了HSK早期的免疫炎症反应。