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在哺乳动物小分子热应激蛋白(Small heat shock proteins,s HSPs)家族中,热应激蛋白25/27kD(HSP25/27)基因的高表达能够主导聚集体沉积,防止错误折叠蛋白之间不可逆结合,从而缓解因内质网受协迫而造成的细胞凋亡。但卵生动物胚胎各组织中HSP25的序列和结构都异于哺乳动物。在热应激条件下,鸡HSP25基因(cHSP25)高表达是否也起着保护细胞的作用仍不明确。cHSP25在热应激诱导的细胞凋亡过程中涉及的信号通路未有报导,探究这些通路中的物质变化对阐明卵生动物特有的HSP25基因在细胞凋亡过程中的作用具有重要研究意义。本研究在37℃培养箱对鸡成纤维细胞系(DF-1)分别进行干扰和过表达cHSP25基因,通过数字基因表达谱(DGE)分析参与细胞凋亡的相关通路及相应基因的表达情况,利用热应激(45℃,3h)处理DF-1,qRT-PCR检测相关基因和流氏细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明:(1)干扰组cHSP25基因mRNA相对表达量下降50%;过表达组cHSP25基因mRNA相对表达量升高500倍。(2)DGE测序分析结果揭示,与对照组相比,干扰组只有1个未注释的下调差异表达基因;过表达组共有95个差异表达基因,其中60个为表达量上调基因,35个为下调基因。与干扰组相比,过表达组共有32个差异表达基因,其中有19个为表达量上调基因,13个为下调基因。鸡DF-1过表达cHSP25后,KEGG通路分析发现,PPARG和LAMA2富集于癌症通路等;BDNF富集于嗜中性粒细胞信号通路和经典MAP激酶信号通路。(3)在热应激处理鸡DF-1后,过表达组的HSP27和HSP70基因的表达显著下降,差异表达基因BDNF、LAMA2和PPARG及其相关通路的下游基因AKT和NFk B的表达量显著下调,流氏细胞术检测发现,S期细胞数增加,总凋亡细胞数增加。综上所述,在热应激条件下,鸡DF-1细胞系cHSP25基因持续高表达促使细胞周期停滞和加剧细胞凋亡,其通过下调HSP27和HSP70基因表达,并且抑制BDNF、LAMA2和PPARG及其下游通路基因AKT和NFk B在中性粒细胞信号通路和MAPK信号通路等的作用实现。