猪腺病毒(porcine adenovirus virus,PAdV)于1964年在英格兰的一头患有腹泻的仔猪直肠拭子中首次被分离到,此后,猪腺病毒又相继在患有脑炎、肾炎、呼吸系统疾病的猪身上被分离到。迄今,已在猪体内发现猪腺病毒A、B、C三个种。本研究目的是通过建立一种简单、快捷、灵敏度较高的多重PCR检测方法来区分猪腺病毒各个种,探究猪腺病毒的传播及危害提供可靠的鉴定方法。本研究第一部分,通过登录NCBI网页,从GenBank数据库中下载已上传的猪腺病毒的基因序列,挑选出12条序列,对各序列比对设计出猪腺病毒各个种的检测引物。通过对所建立PCR方法各条件进行优化、多次重复试验,建立了猪腺病毒多重PCR检测方法。通过验证试验,证明了本实验建立的多重PCR方法具有特异性强、敏感性高、方法稳定的特点。本研究第二部分,利用本实验所建立的猪腺病毒多重PCR检测方法,对来自屠宰场的191份商品猪肺脏及来自集约化猪场的259份仔猪肛门拭子进行PCR检测。检测结果显示猪腺病毒A、B、C三种的阳性检出率依次为:猪腺病毒A种(20.28%)>猪腺病毒B种(8.49%)>猪腺病毒C种(5.41%),在病变的猪肺脏中猪腺病毒的阳性检出率高于健康猪肺脏,在腹泻猪的肛门拭子中猪腺病毒的阳性检出率高于健康猪肛门拭子。从本试验检测结果可推断:猪腺病毒的感染可能与猪呼吸道疾病的及猪肠道病毒继发感染有关。同时,使用猪腺病毒多重PCR方法,对接种过猪腺病毒A种并经五次传代的Vero、ST、Marc-145、PK-15、BHK-21细胞进行PCR检测,结果发现仍可以检测到PAdV-A,但是以上细胞传至第六代后,检测不到PAdV-A。本研究建立的猪腺病毒多重PCR方法,能够快速、准确同时检测猪腺病毒A、B、C种,为了解猪腺病毒临床感染和传播提供技术手段,同时也为猪腺病毒的分子流行病学调查研究奠定基础。