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益生菌对于人体的健康保健功效早已被公认,益生菌产品已成为人们健康生活中保健食品的首选。为满足消费者和市场产品多样性的需求,并保证产品的较高活菌数,本文从益生菌产品的菌种选择出发,通过优化菌株生长培养基,筛选适宜的抗热保护剂,经喷雾干燥最终获得活菌数较高的干燥菌粉并制得了益生菌片剂和颗粒剂。主要的研究结果如下:
(1)嗜酸乳杆菌和双歧杆菌是健康人体肠道中优势有益菌,对人体的健康保健作用已被证实,并在产品生产过程中广泛应用。实验室保藏菌种经培养后,其菌落形态:圆形、隆起、光滑边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地;镜检菌体形态:呈短杆状,单个或成双排列,有些末端分叉或呈V形,菌体形态较均一,无鞭毛,不运动。革兰氏染色阳性,过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚试验、硫化氢试验均为阴性。结合《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)进行对照并参考菌体镜检形态,可以判定为嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的混合菌株。
(2)通过Plackett-Burman设计找出了乳清基质中其他增殖因子对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌菌体发酵培养影响显著的3个因素:大豆分离蛋白、西红柿汁、胡萝卜汁;然后通过最陡爬坡试验逼近最大响应区域;最后设计中心组合实验,找出了最佳乳清培养基配方(4%乳清粉、1.2%大豆分离蛋白、9%西红柿汁、12%胡萝卜汁、0.5%半胱氨酸盐酸盐、0.04%低聚异麦芽糖、0.3%K2HPO4)。经37℃培养18h后,嗜酸乳杆菌和双歧杆菌活菌数可达9.8×109cfu/mL。
(3)有效保护剂的使用是研制高活性干燥益生菌产品的关键之一。根据SAS9.0软件响应面分析方法,优化所得的复合保护剂配方为:海藻糖16%、甘油6%、明胶0.14%。75℃保温30min处理,菌体存活率可达16.58%;喷雾干燥所得干燥菌粉的菌体存活率为12.30%,活菌数为1.23×108cfu/g。
(4)以喷雾干燥菌粉为原料(用量为20%),可压性淀粉(用量为40%)、糖粉和糊精(二者比例为2:1,用量为30%)、甘露醇(用量为9%)及硬脂酸镁(用量为1%)为辅料采用粉末直接压片法无法获得成型片剂产品。同条件同比例的原辅料(可压性淀粉改为玉米淀粉)由5%淀粉糖浆作为黏合剂湿法制粒压片法所得的片剂产品外观较好、硬度适宜,产品活菌数可达3.1×106cfu/g。
(5)以喷雾干燥菌粉为原料(用量为20%),玉米淀粉(用量为40%)、糖和糊精(二者比例为2:1,用量为30%)、甘露醇(用量为10%)为辅料,选用5%淀粉糖浆作为黏合剂湿法制粒所得的颗粒剂产品颗粒均匀、色泽良好、溶解性好,产品活菌数可达8.0×106cfu/g。