论文部分内容阅读
背景：氯胺酮是一类非竞争性N-甲基D-天冬氨酸受体（NMDA受体）拮抗剂，临床上广泛用于手术病人和ICU病人的麻醉和镇痛。氯胺酮对炎症反应具有调节作用，但在不同动物模型及不同细胞中氯胺酮的作用不同。氯胺酮影响炎症反应的确切分子机制尚未阐明。TLR4受体是存在于多种细胞表面参与固有免疫反应的重要受体，本实验探讨氯胺酮对RAW264.7细胞TLR4受体表达的影响及可能存在的分子机制。 目的：探讨氯胺酮对RAW264.7细胞TLR4受体表达的影响及可能存在的分子机制。 方法：氯胺酮、MK-801或N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)处理细胞30min后加入脂多糖（LPS）或PBS,4h后通过RT-PCR检测TLR4mRNA表达的变化。氯胺酮处理细胞6h后利用流式细胞学分析法、免疫细胞荧光检测TLR4表达变化。氯胺酮处理细胞4h后，应用放线菌素D检测TLR4mRNA半衰期。使用pRL-GV238与TLR4-luc共转染RAW264.7细胞36h后，给予氯胺酮处理6h，检测荧光活性的变化。RT-PCR检测NR1在RAW264.7细胞及小鼠腹腔巨噬细胞中的表达。 结果：RAW264.7细胞给予氯胺酮或MK-801处理后，TLR4表达明显增高；在给予氯胺酮或MK-801处理30min后再加入LPS,仍可发现TLR4表达明显增高,在NMDA处理组并未发现此现象。氯胺酮处理对TLR4mRNA半衰期无明显影响。氯胺酮可引起Tlr4基因转录增加。在RAW264.7细胞及小鼠腹腔巨噬细胞中并未发现NR1mRNA表达。 结论：氯胺酮可通过增加Tlr4基因转录增加TLR4受体在RAW264.7细胞中的表达，但氯胺酮的上述作用不通过NMDA受体实现。