切除淤血肝组织对大鼠肝大部分切除术后早期肝功能恢复的影响

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背景和目的:肝淤血是肝部分切除术后的常见并发症,大范围淤血将会导致患者术后肝功能受损加重并增加患者发生肝衰竭的机率,而切除淤血肝组织对其肝功能恢复的影响目前还不清楚。本实验在建立肝大部分切除大鼠模型基础上,对该模型尾状叶分别予以假手术处理、淤血处理、以及淤血3分钟后再切除处理。并检测不同处理方式对大鼠肝大部分切除术后肝功能相关指标及死亡率的影响,以此探讨在发生肝淤血基础上切除淤血肝组织对大鼠肝大部分切除术后早期肝功能恢复的影响。方法:本实验分为两个阶段,第一阶段:建立模型练习阶段,查阅大鼠肝部分切除动物模型文献,熟悉大鼠肝叶解剖特点,练习制作稳定的相关动物模型。第二阶段:探讨大鼠在肝大部分切除模型基础上分别予以假手术处理、淤血处理、以及淤血3分钟后再切除处理3组动物模型术后肝功能恢复情况及其机制。具体方案如下:采用6-7周龄,体重在200-250g之间健康雄性SD大鼠作为研究对象。在建立肝大部分切除模型基础上,按照非淤血、淤血、淤血切除三种不同处理方式将大鼠随机平均分为3组,分别是非淤血组:肝中叶+左叶切除组;淤血组:肝中叶+左叶切除+尾状叶淤血组;淤血切除组:肝中叶+左叶切除+尾状叶淤血3分钟后再切除尾状叶组。每组20只大鼠用于观察术后5天生存率,另外10只用于实验检测,于术后12小时、24小时各取5只大鼠,先用静脉测压尺测定门静脉压力,待压力测定完之后,抽取血液,采集肝脏标本。之后全自动生化分析仪检测肝功能指标。HE染色观察肝脏组织病理变化。westernblot检测cleavedcasepase-3蛋白表达情况。rt-pcr检测炎症因子(tnf-a、il-6)表达。免疫组织化学法检测肝脏巨噬细胞、中性粒细胞浸润。结果:第一部分:大鼠70%肝切除模型与70%肝切除合并尾状叶淤血或切除淤血尾状叶模型均是稳定且利于研究的肝切除模型。第二部分:1、术后各组5天生存率:淤血组术后5天生存率明显低于非淤血组,而在发生肝淤血基础上切除淤血肝组织的淤血切除组术后5天生存率明显高于淤血组。2、术后各组总胆红素水平:术后24小时总胆红素水平淤血组高于非淤血组。而在发生肝淤血基础上切除淤血肝组织的淤血切除组术后24小时总胆红素水平明显低于淤血组。3、术后各组病理变化(he染色):术后24小时,淤血组肝脏组织出现明显肝细胞肿胀,肝血窦消失。与非淤血组、淤血切除组相比,肝脏组织出现更多空泡样变性细胞。4、术后各组cleavedcasepase-3蛋白表达量:术后24小时淤血组cleavedcasepase-3蛋白表达高于非淤血组和淤血切除组。5、术后各组tnf-a、il-6相对表达量:术后12小时、24小时tnf-a、il-6相对表达量淤血组高于非淤血组和淤血切除组。6、术后各组巨噬细胞、中性粒细胞浸润情况:术后24小时,淤血组与非淤血组、淤血切除组相比肝脏组织出现更多巨噬细胞、中性粒细胞浸润。7、术后各组门静脉压力变化:术后12小时、24小时门静脉压力淤血组高于非淤血组、淤血切除组。结论:1.大鼠70%肝切除模型与70%肝切除合并尾状叶淤血或切除淤血尾状叶模型,造模成功率高,模型稳定。可用于关于切除淤血肝组织对大鼠肝大部分切除术后早期肝功能恢复影响的研究。2.在大鼠70%肝切除情况下,尾状叶淤血在早期会引起非淤血部分肝组织发生细胞空泡样变性、细胞凋亡增加、炎症加重、门静脉压力升高,导致肝功能损伤加重,最终增加大鼠死亡率。而切除淤血尾状叶能减轻上述改变,降低大鼠死亡率。
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