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本研究根据国内外已经发表的传染性支气管炎病毒（IBV）核蛋白（NP）基因核苷酸序列，设计并合成了核蛋白基因的特异性引物NP3、4和NP5、6。利用RT-PCR技术分别对IBV国内分离株DB株、XJ株、DC株、HD株的核蛋白基因进行了特异性扩增，得到了大小为1.4Kb左右的核苷酸片段。之后，利用平端连接的方法将四个核蛋白基因片段分别克隆到载体质粒PUC19的SmaI酶切位点，经过酶切、PCR鉴定和序列测定证实分别得到了含有IBV核蛋白基因的重组质粒PUC19-XJ-N、PUC19-DC-N、PUC19-HD-N、PUC19-DB-N。其中PUC19-DB-N包含有DB株IBV的核蛋白全基因序列，全长1.23Kb，另外三个重组质粒分别包含有1.199Kb的核蛋白基因片段。 将四株IBV国内分离株的核蛋白基因序列同Genbank数据库中已经发表的十株参毒株的核蛋白基因序列进行了比较分析，各毒株之间的同源性在86％-98％之间。利用Genruner软件推导出各毒株的核蛋白氨基酸序列，在氨基酸水平上不同毒株之间表现出的同源性在88％-97％之间。系统进化分析表明，我国的四个分离株跟澳大利亚群的N1/62株和VICS株的亲缘关系最为密切。其中，DC株已经单独成为一个分支，发生了较大程度的变异。 设计并合成了另外一对核蛋白基因特异性引物NP7、8，上下游引物5′末端分别引入了BamHI和NcoI限制性内切酶位点，对pUC19-DB-N中的核蛋白基因进行了特异性扩增，扩增产物经过BamHI、NcoI的消化后，克隆到杆状病毒体外表达系统转移载体pBlueBacHis B的BamHI和NcoI位点之间，经过酶切、PCR鉴定证明得到了重组转移载体pBlue-DB-N，序列分析证实其中的核蛋白基因读码框完全正确可以用于转染实验。 在脂质体转染试剂介导下，将重组杆状病毒转移载体pBlue-DB-N与线性化的杆状病毒DNA共转染对数生长期的Sf9昆虫细胞，经过三轮蚀斑纯化，获得了重组杆状病毒rBac-DB-N。提取重组杆状病毒DNA利用特异性引物NPa/b进行PCR扩增得到了大小为2Kb左右的片段，证明目的基因片段克隆到了杆状病毒基因组中。Western blot实验结果表明核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中得到了表达，并且具有良好的生物学活性。SDS-PAGE电泳分析显示重组病毒表达的融合蛋白分子量为56KDa左右，薄层扫描显示核蛋白的表达量占细胞蛋白总量的19.4％左右。