4D Label-free定量蛋白组学技术在口腔鳞癌中差异蛋白的筛选与鉴定

来源 :中国人民解放军海军军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wumingshan2009
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研究目的:为探索口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)发病的潜在分子机制,我们应用4D非标记定量(Label-free)蛋白组学分析联合液相色谱-质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术鉴定和分析OSCC患者癌旁与癌组织中蛋白质的差异,从而筛选出与OSCC发病相关的关键差异蛋白和富集的KEGG信号通路,并对其进行功能鉴定。研究方法:根据纳入与排除标准,对5名符合标准OSCC患者的癌组织(实验组)及癌旁组织(对照组)进行4D Label-free蛋白组学实验,从生信分析结果中筛选出与OSCC发病相关的变化显著差异蛋白,然后通过基因本体论(GO)与基因组百科全书(KEGG)对筛选出的差异蛋白进行相关功能富集分析。进一步通过Western Blotting和IHC方法对其进行验证。研究结果:4D Label-free蛋白组学分析显示,在本研究中,共鉴定出77个差异蛋白(上调蛋白66个,下调蛋白11个)。在GO功能中表达量上调最明显的差异蛋白是酪氨酸蛋白磷酸酶非受体2型(PTPN2)、Rab-like蛋白6(RABL6);KEGG富集分析中癌症转录失调通路富集差异蛋白明显。Werstern Blotting结果显示PTPN2在肿瘤组织中高表达;免疫组化结果显示肿瘤组织中核染PTPN2较为明显,癌旁组织细胞中无PTPN2核染。研究结论:本研究通过4D Label-free蛋白组学分析对OSCC患者癌组织及癌旁组织进行了差异蛋白筛选,并利用GO和KEGG数据库对所有差异蛋白进行富集分析。通过研究,我们筛选出与OSCC发病密切相关的PTPN2蛋白,KEGG发现差异蛋白富集的通路主要为代谢通路与癌症转录失调通路。进一步通过Werstern Blot和IHC对筛选出的蛋白进行了验证,结果提示PTPN2与OSCC发病呈正相关。该研究结果可为下一步探索OSCC靶向治疗药物提供分子生物学依据。
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