目的:探讨血浆置换(Plasma Exchange，PE)治疗对重型肝炎患者血清中内毒素、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)的清除作用，并用标本血清干预大鼠枯否细胞(Kupffer cells，KCs)，比较PE治疗前后血清对枯否细胞表达TGF-β1的影响，为研究重型肝炎的发病机制及PE治疗重型肝炎的作用机制提供实验依据。 方法:1.20例重型肝炎患者血清标本来自泸医附院感染科自2007年3月至2007年7月期间的住院病例。重型肝炎诊断符合2000年《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准。所选病例均符合人工肝支持系统(Artificial liver support system，ALSS)PE治疗的适应症，运用plasauto IQ型血浆置换治疗仪(日本旭医疗株式会社，中空纤维膜型血浆分离器OP-08W进行治疗。PE治疗前、后均采外周血，一份立即送检验科进行肝功能指标、凝血功能检查，另一份离心分离血清，置于-80℃冰箱保存，最后集中检测内毒素和TGF-β1细胞因子。20例对照组血清来自健康志愿者。2.标本血清内毒素含量测定。采用鲎试剂(tachypleus amebocytelysate，TAL)的合成基质偶氮显色法原理进行检测。3.标本血清TGF-β1含量测定。采用ELISA酶联免疫吸附法进行检测。4.健康志愿者及重型肝炎患者PE前、后肝功能指标(丙氨酸转氨酶ALT、天冬氨酸转氨酶AST、血清总胆红素TBIL、直接胆红素DBIL)及凝血功能(凝血酶原时间PT，凝血酶原活动度PTA)的检测，使用全自动生化仪及血凝仪进行检测，由泸医附院检验科完成。5.枯否细胞的分离培养和鉴定:采用Ⅳ型胶原酶灌注、Percoll细胞分离液密度梯度离心及选择性贴壁分离纯化枯否细胞，并在倒置显微镜下观察其形态特征，采用碳素墨水吞噬试验、过氧化物酶染色进行KCs鉴定。6.实验分组。分三组:(1)PE前组:分离培养24小时的枯否细胞加重型肝炎患者PE前血清与等量RPMI-1640液配成的培养液培养24小时。(2)PE后组:分离培养24小时的枯否细胞加重型肝炎患者PE后血清与等量RPIM-1640液配成的培养液培养24小时。(3)健康对照组:分离培养24小时的枯否细胞加健康志愿者血清与等量RPMI-1640液配成的培养液培养24小时。7.在标本血清干预24小时后采用免疫细胞化学方法比较PE前后血清对大鼠枯否细胞表达TGF-β1的影响。8.统计学方法: 结果：采用SPSS14.0统计学软件分析数据，所有数据以均数±标准差(x±SD)表示。三组样本间比较采用单因素方差分析(one way ANOVA)。结果:1.所选重型肝炎患者血清中均检测到内毒素，PE前血清中内毒素为(0.4034±0.108)EU/mL，治疗后降至(0.2284±0.082)EU/mL，对照组为(0.0784±0.026)EU/mL。PE前组及治疗后组与对照组比较，治疗前后比较P<0.01，差异具有统计学意义。2.PE前血清中TGF-β1含量为(0.64±0.29)ng/mL，治疗后降至(0.41±0.27)ng/mL，对照组为(0.11±0.06)ng/mL，三组样本间比较采用单因素方差分析，P<0.01，差异具有显著性。3.重型肝炎患者PE前后肝功能比较，ALT从(453.24±670.7)U/L降至(146.24±175.9)U/L；AST从(383±433.8)U/L降至(176.5±165.6)U/L；TBIL从(307.5±183.2)μmol/L降至(206.3±140.8)μmol/L；DBIL从(195.2±108)gmol/L降至(132.1±82.4)μmol/L，治疗前后比较差异有显著性(P<0.05)。凝血功能比较，治疗前PT为(31.9±11.5)秒、PTA(31.5±12.7)％，PE后凝血功能明显改善，PT为(21.9±6.3)秒、PTA为(48.8±13.4)％，治疗前后比较差异有显著性(P<0.05)。4.原代分离大鼠枯否细胞，每只大鼠细胞得率为8×106个，经0.4％的台盼蓝染色，细胞活率为98％。通过碳素墨水吞噬实验鉴定所分离培养的细胞93％以上为枯否细胞，96％的细胞过氧化物酶染色阳性。5.免疫细胞化学实验结果显示用含50％重型肝炎患者PE前、后血清的培养液培养枯否细胞24小时后，其治疗前组TGF-β1的表达明显高于治疗后组(P<0.05)。与对照组比较，治疗后组枯否细胞TGF-β1的表达高于对照组(P<0.01)。 结论:1.重型肝炎患者存在内毒素血症，PE治疗可有效清除患者血浆中内毒素。2.重型肝炎患者血浆中TGF-β1水平升高，PE治疗可降低血浆中TGF-β1含量。3.PE治疗后血清中ALT、AST、TBIL、DBIL明显降低，PT、PTA明显改善。4.以肝门静脉为流入道的Ⅳ型胶原酶灌注法、Percoll细胞分离液密度梯度离心及选择性贴壁法能有效分离枯否细胞。5.重型肝炎患者PE治疗后血清干预组中大鼠枯否细胞TGF-βl的表达明显减少，以上表明PE可能通过有效清除内毒素、TGF-β1、血清胆红素等毒性物质，减少了体内枯否细胞TGF-β1的后续表达，从而减轻或打破TGF-β1对肝细胞生长抑制的恶性循环，有利于肝细胞再生，促进肝功能的恢复。