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目前体外锚定依赖型动物细胞的主要收获方式是胰酶消化,该方法简单高效,但是在消化过程中会对细胞膜和细胞外基质造成损伤,导致细胞活力和粘附效率的降低。因此,许多非胰酶细胞收获技术被开发出来,以最大限度地减少收获流程对细胞造成的伤害。根据实现方式的不同,非胰酶细胞收获技术主要分为光响应系统、磁场诱导系统、电场响应系统以及热响应系统,其中基于LCST（Lower Critical Solution Temperature）型聚合物的热响应系统,具有实用性好、使用方便等特点,在组织工程（Tissue Engineering）、细胞片工程（Cell Sheet Engineering）以及细胞非胰酶收获（Non-Enzymatic Cell Harvesting）中具有十分广阔的应用前景。目前已经用于构建热响应系统的LCST型聚合物主要有四类:聚（N-异丙基丙烯酰胺）（poly（N-isopropylacrylamide）,PNIPAM）、聚（低聚（乙二醇）甲基丙烯酸酯）（poly（oligo（ethylene glycol）methacrylate）s,POEGMA）、聚（缩水甘油醚）（poly（glycidyl ether）s,PGE）以及聚（2-噁唑啉）（poly（2-oxazoline）s,POx）。聚（2-噁唑啉）也称为假肽,与其他同类聚合物相比,具有生物相容性优异、理化性质稳定、结构与功能高度可调等优势,是一类理想的生物医学应用材料。当前涉及聚（2-噁唑啉）的研究主要集中在抗污界面、药物递送以及基因载体等领域,只有少量报道与非胰酶收获技术有关。然而在这仅有的几项报道中,聚（2-噁唑啉）也因其表面构建方式的复杂性和不稳定性,而无法在实际中应用。因此,为了解决上述的各种问题,本文以聚（2-丙基-2-噁唑啉）和聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）为分子基础,采用一种简单、可靠的浸涂-退火方法,将聚（2-丙基-2-噁唑啉）修饰到玻璃晶片上,构建出用于替代胰酶的细胞热响应收获系统。主要研究内容如下:（1）制备构建热响应表面所需的聚合物,包括羧基官能化聚（2-丙基-2-噁唑啉）和聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）。以腈和酰氯为原料,分别制备出2-丙基-2-噁唑啉和2-（2-甲氧羰基乙基）-2-恶唑啉,并通过阳离子开环聚合获得羧基官能化聚（2-丙基-2-噁唑啉）。以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,采用自由基聚合的方式,制备出聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）。（2）构建热响应表面。涂覆前,将干净的玻璃晶片浸入食人鱼溶液中以清除有机物并活化表面。首先,将活化的玻璃晶片在0.2 wt.%聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）的氯仿溶液中重复浸润三次,取出并退火20分钟,聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）以薄膜的形式共价固定在玻璃晶片上。然后,将初步修饰的玻璃晶片在1 wt.%羧基官能化聚（2-丙基-2-噁唑啉）的氯仿溶液中重复浸润三次,取出并退火16小时,将聚（2-丙基-2-噁唑啉）共价固定在聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）涂层上。（3）热响应表面的生物相容性评价,在聚（2-丙基-2-噁唑啉）热响应表面上接种L929细胞（Mouse Fibroblast）,并在24,48,72小时使用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测细胞活力,同时采用FDA/PI（Fluorescein Diacetate/Propidium Iodide）染色法,对细胞的存活状态进行分析。（4）细胞的热诱导分离与传代培养,在聚（2-丙基-2-噁唑啉）热响应表面上接种L929和Vero细胞（African Green Monkey Kidney Cells）,当细胞生长汇合度达到80%时,将细胞转移至8℃的环境中,促使细胞在2小时内从热响应表面上分离。将收获的细胞接种到96孔板中,培养24小时后对细胞形态以及细胞存活状态进行观察。