南丰蜜橘离体再生及生理生化特征研究

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本研究以南丰蜜橘优良品种的种子实生苗和成年态柑橘茎段为材料,通过组织培养的方法,建立了一套切实可行且高效的南丰蜜橘再生体系,并从内源激素水平、过氧化物酶(POD)活性和过氧化物酶同工酶分析方面对培养物生长分化的有关生理生化机理做了研究。试验结果如下:1.以南丰蜜橘种子实生苗的子叶、上胚轴、茎段、下胚轴为材料,在不同激素配比的改良MS基本培养基上进行愈伤组织诱导、不定芽分化、继代及生根培养。确定了诱导植株再生最适条件:(1)愈伤组织诱导最适培养基激素配比为MS+NAA2mg/L,愈伤诱导率93.02%;(2)诱导不定芽分化最适部位为上胚轴,培养基最适激素配比为MS+6-BA0.8 mg/L+NAA0.1mg/L+D-泛酸钙0.5 mg/L,不定芽分化率可达90%;(3)继代培养中最适的6-BA浓度为0.8 mg/L;(4)生根最适合培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L,生根率66.7%。炼苗移栽后,成活率可达82%。2.成年态南丰蜜橘离体培养时发现,移栽的成年态植株的污染率要远远低于野外自然条件下生长的植株。秋季取材的污染率要低于春季的。初代培养的茎段长度为0.8cm时,污染率比其他长度小,且腋芽萌发率高。所以确定南丰蜜橘成年态初代培养最适的材料为:秋季取自移栽植株的新抽生梢,接种茎段长度为0.8cm适宜。3.通过对成年态茎段离体培养,诱导腋芽丛芽发生,得到了几个品种的初代培养基配方。其中杨小2-6成年态茎段在改良MT+6-BA0.8mg/L +IAA0.2mg/L+水解乳蛋白(LH)500 mg/L+叶酸0.1mg/L培养基中的诱导效果最好,腋芽萌发率达82%以上,且诱导的腋芽数多、长势强;在MS+6-BA0.4mg/L +IAA0.2mg/L+LH500 mg/L+叶酸0.1 mg/L培养基中,小果SS-28成年态茎段的腋芽诱导效果最好;而MS+6-BA0.8mg/L+IAA0.4mg/L+LH500mg/L+叶酸0.1 mg/L培养基最适合于小果SS-7和大果97-1成年态茎段腋芽的诱导和生长。4.测定离体培养过程中四种内源激素的数据表明,植株内源激素的变化是明显的,这也从一个侧面反映出内源激素调控植物生理生化过程。在上胚轴脱分化和再分化过程中,细胞分裂素(ZT)的含量高时,有利于上胚轴再分化出不定芽,赤霉素(GA)可以促进不定芽的生长,脱落酸(ABA)含量升高时会抑制植株的生长;同时也发现茎段培养过程中GA的含量呈一个下降趋势,这与上胚轴培养过程GA的变化是相反的。茎段培养过程中的大量愈伤与生长素(IAA)含量升高有直接关系。测定内源激素的变化也进一步表明内源激素之间的作用是相互的,并不是单一的影响植株的生长和发育。5.测定南丰蜜橘离体培养过程的POD活性和分离POD同工酶,发现在离体培养过程中,POD活性随着培养物的生长发育状态的改变呈现一定变化规律;同时分析POD同工酶酶谱,可以发现同工酶从酶带深浅、宽窄、多少都表现出一定的差异,最明显的差异是成年态培养过程中比上胚轴培养多出一条特征酶带。这些都可以作为分析南丰蜜橘离体培养过程的生理生化指标,为以后的南丰蜜橘离体培养提供一定的参考。
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