莲子心总黄酮的提取纯化及其功能性研究

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莲子心(Lotus plumule)属于睡莲科水生草本植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)成熟种子中的胚根及幼叶,是一种重要的中草药,极具药理研究价值。福建建宁具有“建莲之乡”的美称,是莲子心的主要产地之一。本项目以建宁莲子心为原料,研究了莲子心总黄酮提取、分离纯化及其抗氧化活性、抑菌活性,为其进一步开发利用提供理论依据。(1)以莲子心为研究对象,采用溶剂法提取莲子心总黄酮,通过对溶剂浓度、提取温度、时间、料液比等因素进行单因素实验,并在单因素实验基础上,利用正交实验优化莲子心总黄酮的最佳提取工艺条件。实验结果表明,溶剂法提取莲子心总黄酮的最佳工艺参数为:乙醇浓度75%,提取温度75℃;液料比50:1,提取时间2.5h,在此条件下总黄酮提取率达4.2%。(2)研究酶法辅助提取莲子心总黄酮的最佳工艺。通过对溶剂浓度,酶的添加量,酶解温度,反应时间,体系pH值,液料比等因素进行单因素实验,并在单因素实验基础上进行响应面法优化,确定最佳工艺条件。研究结果表明:酶法辅助提取莲子心总黄酮的最佳工艺参数如下:溶剂为50%乙醇,液料比为19:1,纤维素酶添加量为0.3%,pH=5.5,在60℃下酶解2h,莲子心总黄酮提取率可达4.50%,相对优化后的溶剂法提取莲子心总黄酮,提取率提高7.14%,且色泽金黄,透明澄清。(3)通过测定各种不同类型大孔吸附树脂对莲子心总黄酮的吸附量及解析率,筛选出X-5大孔吸附树脂进行莲子心总黄酮的纯化工艺研究。确定其最佳纯化工艺参数为:上样浓度5.1mg/mL左右,上样pH值为6,上样流速为2BV/h,上样量为2BV,洗脱剂为50%乙醇,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂用量为4BV。纯化后莲子心总黄酮纯度可达50%,且其条件易满足,成本低,效果明显,可应用于工业生产。(4)以VC为对照,分别采用总抗氧化能力试剂盒、羟自由基测定试剂盒、超氧阴离子自由基测定试剂盒等研究莲子心总黄酮的总抗氧化能力、清除羟自由基(·OH)能力、清除超氧阴离子(·O2-)能力及清除DPPH的能力,实验结果显示:莲子心总黄酮对羟自由基(·OH)、超氧阴离子(·O2-)和DPPH具有一定的清除能力,总抗氧化能力强;在浓度相同的情况下,莲子心总黄酮对羟自由基(OH)、DPPH的清除能力与对照组VC相当,对超氧阴离子(O2-)的清除能力及其总抗氧化能力则比VC强。(5)以芦丁为对照,采用杯碟法研究了莲子心总黄酮的抑菌活性。结果表明:莲子心总黄酮对青霉、根霉等霉菌无明显抑制作用,对细菌类抑制作用明显,如金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。且一定范围内温度、pH值的变化对其抑菌活性影响不明显。莲子心总黄酮对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、假单胞杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等细菌的最低抑菌浓度分别为1mg/mL、0.5mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、4mg/mL。
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