大白菜木葡聚糖内糖基转移酶基因的克隆及其拟南芥遗传转化

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大白菜温敏型雄性不育的温敏特性在杂交大白菜的育种实践中具有重要的实用价值,但是其育性是如何受温度影响而发生转变,哪些基因对这个过程参与调控还不明确。本研究克隆了在大白菜温敏型雄性不育系94C9育性转化前后具有明显表达差异的大白菜木葡聚糖内糖基转移酶(xyloglucan endotransglucosylase,XET)基因BrXET,构建了该基因的超量表达载体,通过农杆菌介导的方法转化了拟南芥,并对转基因拟南芥进行了初步的观察。获得了以下结果:1.在大白菜温敏型雄性不育94C9和其保持系94B7中分别克隆得到了大白菜BrXET基因的gDNA序列,两者完全相同,全长为1610 bp。在不育系94C9中克隆得到了该基因完整的开放阅读框序列全长为879 bp,编码292个氨基酸。2.基因结构分析显示大白菜BrXET基因由四个外显子,三个内含子组成。对由cDNA序列推导出的蛋白质序列分析,显示该基因所编码的蛋白质含有XTH基因家族所特有的保守区域、含有潜在的信号肽序列和特定的跨膜结构。3.通过常规PCR的方法从大白菜温敏雄性不育系94C9中克隆得到了BrXE 基因的启动子区序列。在线比对和生物信息学分析表明该序列具有启动子特性,除含有一般启动子结构普遍具有的CAAT-box、TATA-box元件外,还含有一些与光反应、逆境胁迫响应、激素响应、植株形态建成相关的重要元件。4.成功构建了大白菜BrXET基因过表达载体p2301-BrXET,并通过农杆菌介导的蘸花法转化了哥伦比亚型拟南芥,经过抗生素抗性筛选、PCR检测及GUS组织化学染色鉴定,获得11个T2代转基因株系,从20个T3代株系中获得了 5个转基因纯系。5.通过对T2代转基因拟南芥的观察,发现大白菜BrXET基因在拟南芥中的过表达可以引起拟南芥莲座叶数量增多和簇生,引起茎生枝条叶片的褶皱,抑制拟南芥主花枝的发育,并且对侧枝的发育也有一定的影响。
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