草除灵高效降解菌的分离鉴定、降解特性及降解途径的研究

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从农药厂污水处理池的活性污泥中分离得到一株能以草除灵为唯一碳源生长的菌株。根据其表型特征、生理生化特性,结合菌株的16S rRNA基因序列同源性分析,将此菌株初步鉴定为Methyloversatilis sp.,命名为cd-1。菌株cd-1液体培养时呈絮状生长,在温度为30℃、pH 8.0的R2A培养基中生长最好;利用有机氮源和有机碳源生长较好;菌株对通气量没有特殊要求;该菌株不耐盐,NaCl浓度对菌株生长影响很大,NaCl浓度在0g/L~5g/L时生长最好;菌株cd-1对氯霉素和氨苄青霉素有抗性,对供试的其他抗生素均敏感。菌株cd-1在温度为30℃、pH为8.0时降解草除灵最好;接种量为2%时,菌株在草除灵浓度为100mg·L-1的无机盐液体培养基培养48h后,草除灵残留浓度仅为0.85mg·L-1,降解率达到99%;接种量由0.5%提高到8%,可以迅速加快草除灵的降解;当草除灵浓度为25 mg·L-1时,16h时草除灵残留浓度仅为1.44 mg·L-1,草除灵浓度提高到400 mg·L-1时,48h时草除灵浓度仍高达284.56mg·L-1,说明高浓度会对菌株产生毒害作用,抑制菌株对草除灵的降解;菌株利用有机氮源降解草除灵最快;通气量对菌株降解草除灵没有影响;加入蛋白胨、酵母粉和LB溶液可以提高菌株对草除灵的降解率。在土壤中接种降解菌cd-1可以加快草除灵的降解,土著微生物与外源投加的降解菌以协同作用的方式降解草除灵,提高了土壤中草除灵的降解速率。通过MS/MS和GC-MS联合检测,研究了草除灵在高效降解菌株cd-1作用下的降解途径,总共检测到了3个新的代谢产物。通过质谱图分析及代谢产物累积转换关系,鉴定3个代谢产物分别为benazolin、7-chloro-3-Methylbenzo[d]thiazol-2(3H)-one和2-chloro-6-(methyle-neamino)benzenethiol。初步确定代谢途径,先由benazolin-ethyl转化为benazolin,接着由benazolin转化为7-chloro-3-methylbenzo[d]thiazol-2(3H)-one,最终转化为2-chloro-6-(methyle-neamino)benzenethiol。为了便于菌株的实际应用,还对菌株的固定化进行了研究。采用海藻酸钠包埋法固定高效降解菌,结果表明海藻酸钠浓度为3%,CaCl2浓度为3%,固化时间为12h时,制得的固定化小球机械强度最好,对草除灵的降解效果也最好。固定化细菌的降解速度比游离态细菌的降解速度慢,但是固定化细菌抗pH和温度变化能力比游离态细菌强,对pH和温度的忍受范围更广。固定化降解菌在合适的重复使用次数内有较高的稳定性和反应活性,可用于固定化微生物反应器的构建。
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