【摘 要】
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目的:甲状腺癌是最常见的内分泌相关恶性肿瘤,其中甲状腺乳头状癌是最普遍的甲状腺癌亚型。许多研究已经证明,环状RNA（circ RNA）参与细胞的增殖、分化、凋亡和侵袭,在肿瘤进展过程中发挥着重要的调节作用。葡萄糖代谢异常是肿瘤细胞的一个重要特征,即使有足够的氧气供应,癌细胞仍然倾向于通过效率较低的糖酵解产生能量,而糖酵解相关酶丙酮酸激酶M2（PKM2）的异常表达在肿瘤细胞中最为常见。已有研究发现癌
【基金项目】
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2018年辽宁省高等学校创新团队（编号:07465）
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目的:甲状腺癌是最常见的内分泌相关恶性肿瘤,其中甲状腺乳头状癌是最普遍的甲状腺癌亚型。许多研究已经证明,环状RNA（circ RNA）参与细胞的增殖、分化、凋亡和侵袭,在肿瘤进展过程中发挥着重要的调节作用。葡萄糖代谢异常是肿瘤细胞的一个重要特征,即使有足够的氧气供应,癌细胞仍然倾向于通过效率较低的糖酵解产生能量,而糖酵解相关酶丙酮酸激酶M2（PKM2）的异常表达在肿瘤细胞中最为常见。已有研究发现癌症中许多失调的circ RNA可调节PKM2表达。N6-甲基腺苷（m6A）是真核线性m RNA和非编码nc RNA中最普遍的内部化学修饰,它影响RNA加工、核输出、翻译、降解和RNA-蛋白质相互作用等。本文旨在研究m6A修饰调控的circ RNA在PTC中的作用,并明确此circ RNA对PTC生物学行为的影响和作用机制。方法:1、通过定量实时PCR（q RT-PCR）、蛋白质印迹和免疫组织化学以探索circ NRIP1在PTC组织和邻近的非癌性甲状腺组织中的表达。2、通过使用q RT-PCR、CCK8实验,葡萄糖定量和乳酸定量试剂盒以及Seahorse实验分析研究circ NRIP1对PTC糖酵解和生长的影响以及筛选靶向基因PKM2。3、通过生信分析,q RT-PCR、蛋白质印迹和双荧光素酶报告基因检测分析以探索与circ NRIP1和PKM2竞争结合的miR-541-5p和miR-3064-5p。4、通过使用CCK8实验,葡萄糖定量和乳酸定量试剂盒以及Seahorse实验分析circ NRIP1,miR-541-5p和miR-3064-5p对PTC糖酵解和生长的影响。5、通过体内裸鼠荷瘤实验和18F-FDGmicro PET显像检测circ NRIP1,miR-541-5p和miR-3064-5p对PTC异种移植瘤生长和葡萄糖摄取的影响。6、通过Me RIP-q PCR、双荧光素酶报告基因检测分析以及体内体外实验探索了circ NRIP1的m6A修饰机制。结果:1、circ NRIP1表达在PTC组织中显著上调（P＜0.001）。2、在PTC患者中,高circ NRIP1表达与较高的肿瘤淋巴结转移（TNM）分期（χ2=7.412,P=0.006）和较大的肿瘤直径（tumor diameter）相关（χ2=4.774,P=0.029）。3、在体外上调circ NRIP1显著促进PTC细胞糖酵解和增殖。4、circ NRIP1通过靶向PKM2促进PTC细胞的增殖和糖酵解。5、circ NRIP1和PKM2竞争结合miR-541-5p和miR-3064-5p。6、上调miR-541-5p和miR-3064-5p可以抑制circ NRIP1对肿瘤的增殖和糖酵解的促进作用。7、下调m6A去甲基化酶ALKBH5的表达可以促进PTC细胞的糖酵解和增殖。8、上调ALKBH5能使circ NRIP1去甲基化进而抑制PTC细胞的糖酵解和增殖结论:去甲基化酶ALKBH5调控circ NRIP1 m6A甲基化修饰,circ NRIP1通过竞争性结合miR-541-5p和miR-3064-5p调控PKM2促进PTC的糖酵解代谢,进而影响其增殖
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