【摘 要】
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沙门氏菌对动物、对人均有致病性。沙门氏菌病临诊症状为败血症和肠胃炎等,一般伴有潜伏期,本病一年四季均可发生。对于人类及动物来说,是一种严重的疾病,重者也可导致人及动
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沙门氏菌对动物、对人均有致病性。沙门氏菌病临诊症状为败血症和肠胃炎等,一般伴有潜伏期,本病一年四季均可发生。对于人类及动物来说,是一种严重的疾病,重者也可导致人及动物的死亡。VBNC(viable but non-culturable):活的非可培养状态,即当细菌处于不良条件下,细胞会发生萎缩变性,有的会呈现球形,用普通方法培养细菌不能生长,但用特殊的方法仍可证明其具有活性。虽然目前细菌的VBNC状态发生机制尚不明确,但是这种状态可能代表着细菌在面对环境压力条件下所产生的一种求生反应。本研究采用不同浓度的NTG化学诱变方法,对鼠伤寒沙门氏菌进行诱导突变,再在VBNC条件下筛选出一株在平板培养基上仍然具有生长繁殖能力并且具有抗低温和寡营养状态的VBNC沙门氏菌突变菌株,用突变体进行研究VBNC状态的发生机制。本研究应用SSH技术,构建了沙门氏菌-VBNC沙门氏菌突变体的SSH文库,并获得差异基因片段,经T载体连接、克隆到大肠杆菌感受态中,再通过PCR筛选验证和地高辛杂交筛选,获得了携带差异片段的大肠杆菌菌株。经过测序最终获得了59株携带差异片段的大肠杆菌菌株。经生物信息学软件分析后结果显示,其中有20个未知功能基因其余基因被分为四大类:(1)细胞结构基因;(2)新陈代谢相关基因;(3)信号传导基因;(4)未分类基因,并筛选出VBNC发生相关基因-谷胱甘肽转移酶基因。
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