目的：探讨骨髓基质细胞（BMSCs）联合施万细胞（SCs）脑内移植对BMSCs增殖、分化及对帕金森病（PD）大鼠的治疗作用。 方法：1、BMSCs培养：无菌条件下取体重为180g的SD大鼠胫骨和股骨，冲洗髓腔，将细胞悬液接种到含有15％胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养液中培养，7d后进行传代扩增，以获得充足的BMSCs，并用Brdu、流式细胞仪（FCM）检测。2、SCs培养：取新生8d的SD大鼠双侧坐骨神经，剥离神经外膜后剪成碎片，接种到含有15％胎牛血清的DMEM/F12培养液中培养，按1：3进行传代。3、将培养传至第2代的SCs与第3代BMSCs共培养。用S100免疫荧光法，nestin/Brdu、TH/Brdu免疫荧光法分别鉴定SCs和BMSCs的增殖与分化。4、立体定位下，于左侧黑质致密部（SNc）和腹侧被盖（VTA）注射6-OHDA制备PD大鼠模型。将成功PD大鼠模型随机分成3组，即对照组（注入生理盐水）：BMSCs移植组；BMSCs+SCs移植组。5、将上述培养传代至第3代的BMSCs和BMSCs+SCs，浓度为1．0×106细胞/μl，分别移植到PD大鼠损伤侧纹状体内，于移植后7d、14d、30d检测PD大鼠旋转行为变化后，深麻下处死，灌流固定取脑做冰冻切片，行Brdu、TH免疫荧光染色。 结果：细胞培养1、BMSCs原代培养24h后，可见瓶底有一些梭形或三角形的成纤维样细胞生长，它们多聚集成集落。此后3d细胞形态多趋向于成纤维样细胞形态，胞质丰富，核椭圆形，核仁清晰，呈平行排列生长或漩涡状生长，第3代BMSCs表面抗原经FCM检测，结果用CellQuest软件分析显示，所培养的细胞CD29和CD90为阳性，CD45为阴性，Brdu免疫荧光标记阳性。2、SCs培养24h后，可见少数贴壁细胞，3d后，大量细胞从组织块边缘迁出，胞体较小，呈长梭形，多为双极或多极，偶见扁平椭圆形细胞，免疫荧光呈S100阳性反应。3、BMSCs+SCs共培养8h后细胞完全贴壁，细胞的立体感及折光性一般，突起较短。3d时，可见细胞数量较前明显增多，部分细胞胞体收缩，突起细长，呈双极、三极或多极；7d时细胞数量无明显增加，胞体立体感增强，一些突起末端出现分支，与相邻细胞的突起连接成网状。免疫荧光双标鉴定结果显示。3d时，可见nestin/Brdu双标细胞，细胞核为Brdu红色标记，细胞浆及突起为nestin绿色标记，未见TH/Brdu双标细胞，7d时，nestin/Brdu双标细胞数目减少，可见TH/Brdu双标细胞，细胞核为Brdu红色标记，细胞浆及突起为TH绿色标记，Brdu/nestin（3d）、TH/Brdu（7d）阳性细胞率分别为（28．1±2．3）％，（19．2±1．6）％，而BMSCs单独培养组始终只见Brdu单标细胞，未见阳性双标细胞。在体移植1、细胞移植后第7d，各组大鼠的旋转行为无明显变化；第30d时，与对照组比较，BMSCs+SCs共移植组和单纯移植BMSCs组旋转行为有较为明显的改善（P<0．05），其中BMSCs+SCs共移植组较单纯移植BMSCs组更为突出（P<0．05）。2、Brdu免疫荧光染色显示，移植区Brdu阳性细胞为TRITC红色荧光标记，大多数细胞较小，无突起，呈圆形或椭圆形，少数呈多边形或不规则形态。3、TH免疫荧光显示，从第7d起，在移植区可见胞浆呈FITC绿色荧光标记的TH阳性神经元（12-23个/视野），呈圆形或椭圆形，无明显突起，分布在针道与纹状体实质的交界处；在第30d，在针道的两侧TH阳性神经元增多（22-30个/视野），有的可见少许突起。BMSCs移植组移植区也可见FITC绿色荧光标记的TH阳性神经元。经过图像处理和数据统计，BMSCs+SCs移植组TH神经元阳性率高于BMSCs单独移植组（P<0．05）。 结论：1、从体重180g SD大鼠胫骨和股骨，通过贴壁培养法，可以分离和纯化得到具有不断增殖和自我更新能力的BMSCs。2、从新生8d的SD大鼠双侧坐骨神经分离得到的细胞，体外培养后可被特异性抗体S100标记，观察到细胞形态特征与文献报道一致，证实是SCs。3、在体内、外条件下，SCs都能诱导BMSCs分化为TH阳性神经元。4、BMSCs单独移植或BMSCs+SCs联合移植入PD大鼠的纹状体内，对于PD大鼠的旋转行为均有改善，但联合移植优于单独移植。5、BMSCs、SCs可供选择用于中枢神经系统（CNS）损伤修复和再生的理想替代种子细胞，二者联合移植效果更好。