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转Bt基因棉的推广为控制我国棉铃虫猖獗为害提供了一项新途径。但棉铃虫对其具有产生抗性的风险将严重威胁转Bt基因棉在生产上的应用寿命。本文采用AFLP分子标记技术，作抗性基因连锁图，确定抗性基因位点，从分子遗传学角度阐明棉铃虫对转Bt基因棉的抗性机理，是转Bt基因棉安全性评价的重要组成部分之一。研究结果为制定抗性治理方案、延缓抗性发展及促进分子技术的进展具有重要的现实和理论价值。 本论文第一章对转Bt基因作物的抗虫性、害虫对转Bt基因作物的抗性发展、抗性治理策略以及AFLP的研究进展等四大方面进行了阐述，这为后续的实验研究提供了理论依据。 第二章为棉铃虫对转Bt基因棉高抗品系的纯化及保持研究。叶片喂饲法进行抗性棉铃虫对转Bt基因棉的筛选结果表明，棉铃虫初孵幼虫取食转Bt基因棉NUCOTN33B苗期叶片3d的平均死亡率为31.6％～62.1％，5d的平均死亡率为69.5％～82.3％。经过12代的筛选，棉铃虫对Bt毒素CrylAc的抗性由第49代的329.7倍上升到第59代的2824.0倍，使其重新获得极高水平抗性，抗性种群得到进一步纯化，为进一步研究棉铃虫对Bt棉抗性的分子遗传机理提供保证。 提取高质量的棉铃虫基因组DNA是进行遗传分析的重要前提条件，本论文的第三章即为CTAB法提取棉铃虫基因组DNA的研究。CTAB法主要包括组织消化、CTAB去多糖、氯仿：异戊醇（24：1，Ⅴ：Ⅴ）除蛋白、PEG沉淀DNA、TE重溶DNA沉淀以及RNA酶消化RNA等过程；结果表明该方法提取的棉铃虫基因组DNA的A260/A280的比值绝大部分在1.7～1.9之间，EcoR I／Mse I双酶切的产物大小主要为50～1000bp，符合AFLP分析的要求。 第四章为棉铃虫对转Bt基因棉的抗性遗传及AFLP标记构建的研究。饲料感染法测定结果表明，棉铃虫回交后代（BC）初孵幼虫用含区分剂量40μg／ml CrylAc的饲料饲喂5d后，存活虫数：死亡虫数的比例为1：1，这与该虫对转Bt基因棉的抗性遗传方式为常染色体上不完全隐性的研究结果相一致：AFLP技术是一种多态性检出效率棉铃虫对转Bt基因棉抗性的分子遗传机理较高的分子标记技术，本文在前人研究的基础上，将此技术用于棉铃虫对转Bt基因棉抗性基因（刀次）分子标记的构建，结果表明BtR与AFLP标记EaaMcta02连锁，位于第2条连锁群上EaaMcta02和Eaal讨cta03两个标记之间，遗传图距分别为ro.40cM和13 .90cM;对标记EaaMcta02回收、克隆、测序，仅在68lbp处获得一条特异性条带。本研究结果是抗性分子机理的重要组成部分，并将为制定棉铃虫对转Bt基因棉的抗性监测技术及抗性治理方案提供一个依据。 第五章为两种转Bt基因棉杀虫蛋白Cry1A。表达量的检测研究。用EnviroLogixcry1Ab/cry1A。平板试剂盒检测了两个转cry1Ac基因的棉花品种NucoTN 33“、NucoTN 99B以及常规对照品种苏棉12不同生育期主茎嫩叶、侧枝嫩叶、蕾及蕾的苞叶中杀虫蛋白cry1Ac的含量。结果表明，两种转Bt基因棉Nuco翎33”和99”主茎嫩叶生长前期杀虫蛋白c叮IAc的含量显著高于生长后期，花铃期（33B和99”分别为4.43和2.93林留g）和吐絮期（3 .87和2.86拌留g）主茎嫩叶中Cry1Ac的含量分别降至苗期第6叶（7.64和8.38林留g）的58%、35%和51%、34%;相同时期的主茎嫩叶和侧枝嫩叶中Cry1Ac的含量均显著高于蕾及蕾的苞叶，前两者Cry1A。的含量均为后两者的两倍以上。关键词:棉铃虫;转Bt基因棉:抗性机理;分子遗传;AFLP;杀虫蛋白CrylAc