APC基因甲基化特异性PCR检测方法的建立及其在肺癌诊断中的应用

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背景 DNA甲基化对转录的抑制作用是表观遗传学中一项非常重要的内容。人类基因组中约有29000个CpG岛,超过60%的基因启动子和第一外显子都包含CpG岛。DNA甲基化与肿瘤的关系正日益引起人们的关注,检测DNA的异常甲基化有助于深入理解肿瘤形成机制,并且可为肿瘤的早期诊断、病理分型、疗效评估及复发监测等提供十分重要的信息。 2004年我国卫生部提供的资料显示肺癌的发病率与死亡率已居恶性肿瘤之首。APC基因,即腺瘤性结肠息肉病相关基因(ademomatous polyposis coli,APC),其蛋白质的表达在肺癌中降低,却很少发现突变。 目的 建立含有弱阳性质控品的甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)检测技术。研究APC基因甲基化对转录的影响及其与肺癌的关系。 方法 酚-氯仿法提取脐带血淋巴细胞DNA,转甲基制备阳性模板,化学修饰,MSP后获得目的片段,克隆到pMD18-T质粒载体,测序筛选阳性和阴性质粒,紫外分光光度法对阳性质粒定量,优化MSP的
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