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目的:构建针对人CD147基因的shRNA真核表达载体,并在宫颈癌HeLa细胞中观察其对CD147基因表达的影响。
方法:根据CD147基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。用脂质体将重组质粒转染到宫颈癌HeLa细胞中,观察其在mRNA和蛋白水平对CD147基因表达的影响。
结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功构建三条表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到宫颈癌HeLa细胞株中。三条shRNA真核表达载体在mRNA水平对CD147抑制率分别为32.5%、66.8%、59.1%;在蛋白水平对CD147抑制率分别为28.3%、63.5%、56.2%。
结论:已成功构建针对人CD147基因的shRNA真核表达质粒,其对宫颈癌HeLa细胞CD147基因的表达具有明显的抑制作用,为进一步研究CD147的功能奠定了基础。