单纯性脑震荡大鼠海马TNF-α的表达及AH6809干预的研究

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目的:建立单纯性脑震荡(pure cerebral concussion, PCC)大鼠模型,观察PCC损伤后大鼠海马脑区TNF-α表达的变化规律及EP2受体抑制剂AH6809对其干预的影响,探讨PCC后TNF-α表达的病理学改变和AH6809的干预作用。方法:在正常大鼠清醒状态下,采用自制“金属单摆闭合式脑损伤打击装置”制备PCC模型,损伤后随机分为3h、12h、1d、2d、3d和7d六组(n=5),另设正常对照组(n=5)。PCC损伤后给予AH6809干预,随机分为1d、2d、3d和7d四组(n=5),每个时间点另设PCC+生理盐水对照组(n=5)。采用免疫组织化学染色、Western Blotting和RT-PCR实验方法,观察PCC损伤后海马脑区不同时间点TNF-α的表达及其时序性变化规律,以及损伤后AH6809对其表达的影响。结果:(一)PCC组(1)免疫组化染色结果显示:正常生理状态下,海马脑区有少量TNF-a阳性表达。PCC损伤后3h、12h、Id、2d、3d各时间点海马脑区TNF-a的阳性表达和TNF-α阳性细胞计数均呈现出逐渐增强趋势,在3d组达高峰,7d组表达出现回落,但仍高于正常组,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)、Vestern Blotting与RT-PCR实验结果显示:TNF-α蛋白和mRNA在正常对照组表达均较弱,PCC损伤后表达呈现出逐渐增强趋势,与免疫组化结果相似,在3d组和7d组分别出现高峰和回落现象,、Vestern Blotting结果中的3h、12h、1d、2d、3d组,RT-PCR结果中的Id、2d、3d、7d组与正常对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。(二)PCC+AH6809干预组(1)免疫组化染色结果显示:AH6809干预组1d、2d、3d和7d组分别与生理盐水对照组相比,TNF-α的阳性表达和TNF-α的阳性细胞计数均出现下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Western Blotting实验结果显示:AH6809干预组1d、2d、3d和7d组分别与生理盐水对照组相比,TNF-α蛋白表达出现下降,差异有统计学意义(P<0.05);(3)RT-PCR实验结果显示:AH6809干预组1d、2d、3d和7d组分别与生理盐水对照组相比,TNF-αmRNA表达在1d组没有下降,仍高于生理盐水对照组,2d、3d、7d组表达出现下降,其中仅3d组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、正常生理状态下,海马脑区有少量TNF-α表达。2、PCC损伤后TNF-α在海马脑区的表达出现一定时序性变化规律,证实TNF-α参与了PCC继发性病理过程。3、AH6809对TNF-α的表达有一定的干预抑制作用。
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