【摘 要】
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RNA干涉(RNAi)是一种新近出现强有力的研究基因功能的技术。通过降解细胞或组织中特定的靶mRNA来沉默或降低编码蛋白质的表达。从GenBank上发表的拟南芥FIE cDNA序列中寻找保
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RNA干涉(RNAi)是一种新近出现强有力的研究基因功能的技术。通过降解细胞或组织中特定的靶mRNA来沉默或降低编码蛋白质的表达。从GenBank上发表的拟南芥FIE cDNA序列中寻找保守区域,设计了4对29nt寡核苷酸序列,体外转录合成4种用于干涉的siRNA。每种siRNA干涉后1、2、3、4天分别取样,以通过RT—PCR法扩增的甜菜M14 FIE基因的特异片段为探针,分别和甜菜M14花蕾总RNA进行Northern杂交,根据杂交信号检测干涉是否发生作用。同时根据已发表的不同植物FIE基因序列的高度同源区,设计一对引物,以甜菜M14花蕾总RNA为模板进行RT—PCR扩增甜菜M14 FIE特异片段。根据RT—PCR产物数量的多少检测干涉是否发生作用。结果表明,将体外转录合成的siRNA用韧皮部微注射的方法导入受体植株后,会产生干涉作用,作用效果在干涉后第三天较为明显,并且持续时间很短。
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