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背景：
脑卒中是仅次于缺血性心脏病的第二大疾病死亡原因，占全世界疾病死亡人数的9％。缺血性卒中是常见的卒中类型，因颈部或大脑的血管阻塞引发，导致大脑产生缺血性损伤。临床上治疗卒中的常规策略是采用溶栓药物或机械血栓切除术去除血栓。然而，除栓后血液再灌注会对大脑结构和功能产生更为有害的影响，临床上称之为脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI)。由于CIRI的病理机制尚未完全阐明，使得目前临床治疗手段与治疗药物选择有限。因此，为缺血性卒中患者寻求新的治疗思路和药物仍然是医学界的重要任务。
补骨脂定(Psoralidin，PSO)是从补骨脂种子中提取的一种天然香豆素，既往研究表明PSO具有抗氧化、抗炎、抗癌等药理作用，但其对CIRI的保护作用及其机制尚未有报道。生长停滞特异性基因6(growth arrest-specific gene6，GAS6)是一种维生素K依赖蛋白，其受体Axl是TAM受体酪氨酸激酶家族中的一员。研究表明，GAS6/Axl信号通路具有调节免疫应答、炎症、氧化应激、细胞生长等作用。重要的是，GAS6/Axl信号通路对阿尔茨海默氏症、多发性硬化症等神经系统疾病具有显著的保护作用。然而，PSO是否能通过调控GAS6/Axl信号通路发挥抗神经细胞HR损伤的作用尚未有研究报道。
本研究探讨了PSO对神经细胞缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation，HR)损伤的保护作用，并证实其是否是通过调控GAS6/Axl信号通路发挥保护作用。研究中使用到的N2a细胞和SH-SY5Y细胞HR损伤模型为经典的脑缺血再灌注损伤对应的体外模型。
研究方法：
以N2a细胞和SH-SY5Y细胞作为研究对象，探索建立合适的缺氧复氧损伤模型。设置对照组、损伤组、不同浓度给药组，使用Muse细胞活力分析仪、荧光显微镜、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)试剂盒、活性氧簇(reactive oxygen species， ROS)试剂盒、Westernblot等设备和方法检测并比较各组相关指标。进一步采用siRNA技术分别干扰GAS6、Axl表达，观察其对PSO抗神经细胞HR损伤作用的影响，验证PSO是否是通过调节GAS6/Axl相关信号通路发挥抗神经细胞HR损伤的作用。
研究结果：
1.与对照组相比，缺氧24h复氧12h损伤可使N2a细胞和SH-SY5Y细胞活力均下降到50%左右，作为后续实验的最佳损伤条件。
2.与对照组相比，PSO给药组的细胞形态和细胞活力无显著变化，说明在实验浓度范围内，PSO没有细胞毒性。
3.与对照组相比，PSO给药组的GAS6、Axl、Nrf-2、PGC-1α、NQO1、NRF1和Bcl2蛋白的水平显著上调(P<0.05)，表明PSO可激活正常神经细胞的GAS6/Axl信号通路。
4.与对照组相比，HR处理显著下调了GAS6、Nrf-2、NRF1、NQO1和Bcl2蛋白的水平，上调Axl、p-Axl蛋白表达水平(P<0.05)；与HR组相比，PSO给药组显著上调了GAS6、NQO1、PGC-1α、NRF1、Nrf-2和Bcl2蛋白的水平(P<0.05)。
5.与ControlsiRNA+PSO+HR组相比，GAS6siRNA+PSO+HR和AxlsiRNA+PSO+HR组细胞损伤加重，细胞凋亡率增加、培养液LDH水平增加、细胞内ROS水平增加(P<0.05)，表明GAS6/Axl信号通路在PSO的神经保护中发挥重要作用。
6.Nrf-2是抗氧化应激调节因子，NQO1为其下游分子。PGC-1α及其下游靶点NRF1具有维持线粒体生物发生的功能。与ControlsiRNA+PSO+HR组相比，GAS6siRNA+PSO+HR组的Nrf-2、NQO1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平显著下调(P<0.05)，表明上述信号通路作为GAS6/Axl的下游通路参与其神经保护作用。
研究结论：
以上结果表明，PSO对神经细胞HR损伤具有明确的保护作用；且其作用机制是通过激活GAS6/Axl信号通路，进而减轻细胞氧化应激损伤和维护线粒体功能，最终发挥其抗HR损伤的作用。综上所述，PSO有望开发成为新的CIRI治疗药物。
脑卒中是仅次于缺血性心脏病的第二大疾病死亡原因，占全世界疾病死亡人数的9％。缺血性卒中是常见的卒中类型，因颈部或大脑的血管阻塞引发，导致大脑产生缺血性损伤。临床上治疗卒中的常规策略是采用溶栓药物或机械血栓切除术去除血栓。然而，除栓后血液再灌注会对大脑结构和功能产生更为有害的影响，临床上称之为脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI)。由于CIRI的病理机制尚未完全阐明，使得目前临床治疗手段与治疗药物选择有限。因此，为缺血性卒中患者寻求新的治疗思路和药物仍然是医学界的重要任务。
补骨脂定(Psoralidin，PSO)是从补骨脂种子中提取的一种天然香豆素，既往研究表明PSO具有抗氧化、抗炎、抗癌等药理作用，但其对CIRI的保护作用及其机制尚未有报道。生长停滞特异性基因6(growth arrest-specific gene6，GAS6)是一种维生素K依赖蛋白，其受体Axl是TAM受体酪氨酸激酶家族中的一员。研究表明，GAS6/Axl信号通路具有调节免疫应答、炎症、氧化应激、细胞生长等作用。重要的是，GAS6/Axl信号通路对阿尔茨海默氏症、多发性硬化症等神经系统疾病具有显著的保护作用。然而，PSO是否能通过调控GAS6/Axl信号通路发挥抗神经细胞HR损伤的作用尚未有研究报道。
本研究探讨了PSO对神经细胞缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation，HR)损伤的保护作用，并证实其是否是通过调控GAS6/Axl信号通路发挥保护作用。研究中使用到的N2a细胞和SH-SY5Y细胞HR损伤模型为经典的脑缺血再灌注损伤对应的体外模型。
研究方法：
以N2a细胞和SH-SY5Y细胞作为研究对象，探索建立合适的缺氧复氧损伤模型。设置对照组、损伤组、不同浓度给药组，使用Muse细胞活力分析仪、荧光显微镜、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)试剂盒、活性氧簇(reactive oxygen species， ROS)试剂盒、Westernblot等设备和方法检测并比较各组相关指标。进一步采用siRNA技术分别干扰GAS6、Axl表达，观察其对PSO抗神经细胞HR损伤作用的影响，验证PSO是否是通过调节GAS6/Axl相关信号通路发挥抗神经细胞HR损伤的作用。
研究结果：
1.与对照组相比，缺氧24h复氧12h损伤可使N2a细胞和SH-SY5Y细胞活力均下降到50%左右，作为后续实验的最佳损伤条件。
2.与对照组相比，PSO给药组的细胞形态和细胞活力无显著变化，说明在实验浓度范围内，PSO没有细胞毒性。
3.与对照组相比，PSO给药组的GAS6、Axl、Nrf-2、PGC-1α、NQO1、NRF1和Bcl2蛋白的水平显著上调(P<0.05)，表明PSO可激活正常神经细胞的GAS6/Axl信号通路。
4.与对照组相比，HR处理显著下调了GAS6、Nrf-2、NRF1、NQO1和Bcl2蛋白的水平，上调Axl、p-Axl蛋白表达水平(P<0.05)；与HR组相比，PSO给药组显著上调了GAS6、NQO1、PGC-1α、NRF1、Nrf-2和Bcl2蛋白的水平(P<0.05)。
5.与ControlsiRNA+PSO+HR组相比，GAS6siRNA+PSO+HR和AxlsiRNA+PSO+HR组细胞损伤加重，细胞凋亡率增加、培养液LDH水平增加、细胞内ROS水平增加(P<0.05)，表明GAS6/Axl信号通路在PSO的神经保护中发挥重要作用。
6.Nrf-2是抗氧化应激调节因子，NQO1为其下游分子。PGC-1α及其下游靶点NRF1具有维持线粒体生物发生的功能。与ControlsiRNA+PSO+HR组相比，GAS6siRNA+PSO+HR组的Nrf-2、NQO1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平显著下调(P<0.05)，表明上述信号通路作为GAS6/Axl的下游通路参与其神经保护作用。
研究结论：
以上结果表明，PSO对神经细胞HR损伤具有明确的保护作用；且其作用机制是通过激活GAS6/Axl信号通路，进而减轻细胞氧化应激损伤和维护线粒体功能，最终发挥其抗HR损伤的作用。综上所述，PSO有望开发成为新的CIRI治疗药物。