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一、目的针对目前市场上抗风湿镇痛类与镇咳平喘类中成药及保健品中非法添加的化学药品进行检测方法学研究,选择常见的14种激素类、10种解热镇痛类、10种镇咳平喘类化学成分,建立快速、简便的TLC、HPLC-DAD快检初筛方法,用于基层单位的快速筛查,建立HPLC-MS-MS检测方法,用于阳性样品的结果确证。为有效打击中成药及保健品中非法添加化学药物的不法行为提供技术依据。二、方法1.TLC方法1.1激素类:色谱条件:薄层板:快检专用板,展开剂:【H-003】（药品检验专用展开剂）;检视方法:喷以碱性四氮唑蓝试液显色,日光下检视1.2解热镇痛类色谱条件:薄层板:快检专用板,展开剂:【H-042】（药品检验专用展开剂,）;检视方法:紫外灯254nm、365nm下、日光下、喷以1%高锰酸钾的稀硫酸溶液,120℃加热20min后在紫外灯365nm下、碘熏蒸等1.3镇咳平喘类色谱条件:薄层板:快检专用板,展开剂:【H-012】、【H-022】（药品检验专用展开剂）;检视方法:紫外灯254nm、365nm、日光下、碘熏蒸、喷以茚三酮试液,105℃加热显色、喷以稀碘化铋钾试液等2.HPLC-DAD方法2.1激素类色谱条件:色谱柱:SHIMADZU Shim-pack VP-ODS（250mm×4.6mm,5μm）C18色谱柱（以下同）,A、B两组流动相:水:乙腈梯度洗脱,柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1,DAD检测器（200nm～400nm）,检测波长240nm,进样量:20μl。2.2解热镇痛类色谱条件:A组:流动相A:10mmol·L-1醋酸铵溶液B:乙腈,梯度洗脱,柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1,DAD检测器（200nm～400nm）,检测波长280nm,进样量:20μl。B组:流动相:20mmol·L-1醋酸钠溶液（冰醋酸调pH5.0）-乙腈（60:40）柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1,DAD检测器（200nm～400nm）,检测波长230nm,进样量:20μl。2.3镇咳平喘类色谱条件:A组:流动相A:10mmol·L-1醋酸铵溶液B:乙腈,梯度洗脱,柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1,DAD检测器（200nm～400nm）,检测波长230nm,进样量:20μl。B组:流动相:0.1mol·L-1磷酸溶液-乙腈（96:4）柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1,DAD检测器（200nm～400nm）,检测波长207nm,进样量:20μl。3.HPLC-MS-MS方法3.1激素类3.1.1色谱条件:色谱柱:SHIMADZU Shim-pack VP-ODS（250mm×4.6mm,5μm）C18色谱柱（以下同）,流动相:A:20mmol·L-1醋酸铵溶液（含0.1%甲酸,V/V）,B:乙腈（A、B两组梯度洗脱程序同2.1）,柱温:室温,流速:1.0ml·min-1（分流比4:1）,进样量:20μl。3.1.2质谱条件:电喷雾离子化正离子检测方式（ESI+）,全扫描一级质谱、选择离子二级扫描质谱检测方式,离子源温度:120℃,去溶剂气温度:400℃,毛细管电压:3.00kv,锥孔电压:15v,萃取电压:3v,去溶剂气流速:750L·h-1,锥孔反吹气流速:50L·h-1。3.2解热镇痛类3.2.1色谱条件:流动相A:20mmol·L-1醋酸铵溶液,B:乙腈（梯度洗脱程序同2.2解热镇痛类A组）柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1（分流比4:1）,进样量:20μl。3.2.2质谱条件:电喷雾离子化正、负离子检测方式（ESI+、ESI）,全扫描一级质谱、选择离子二级扫描质谱检测方式,离子源温度:120℃,去溶剂气温度:400℃,毛细管电压:3.00kv,锥孔电压:15v,萃取电压:3v,去溶剂气流速:750L·h-1,锥孔反吹气流速:50L·h-1。3.3镇咳平喘类3.3.1色谱条件:流动相A:20mmol·L-1醋酸铵溶液（含0.1%甲酸,V/V）B:乙腈（梯度洗脱程序同2.3镇咳平喘类A组）柱温:30℃,流速:1.0ml·min-1（分流比4:1）,进样量:20μl。3.3.2质谱条件:电喷雾离子化正离子检测方式（ESI+）,全扫描一级质谱、选择离子二级扫描质谱检测方式,离子源温度:120℃,去溶剂气温度:400℃,毛细管电压:3.00kv,锥孔电压:15v,萃取电压:3v,去溶剂气流速:750L·h-1,锥孔反吹气流速50L·h-1。三、结果应用上述方法对市场抽验的50种抗风湿镇痛类与镇咳平喘类中成药及保健品进行检测,检出:7种样品中含有解热镇痛类和激素类化学成分,采用HPLC-MS-MS的法建立了34种对照品的标准谱库信息,由于TLC法的灵敏度较低,且辅料等干扰,发现TLC方法检出结果中出现一些假阳性,另外有些成分未被检出,HPLC-DAD方法中一种激素类成分的误判,另检出一种样品中含有TLC、HPLC-DAD方法未检出的对乙酰氨基酚成分。四、结论本研究建立的TLC方法可应用于药品检测车及实验室的的快检初筛,HPLC-DAD方法可应用于基层检验单位的初筛检验,HPLC-MS-MS方法可用于上述成分的结构确证,三种方法各具特色,为保障人民群众的饮食用药安全,具有十分重大的现实意义。