【摘 要】
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目的:本研究中,我们拟探索长链非编码RNA-LEGLTBC（long non-coding RNA,lnc RNA-LEGLTBC）在糖脂毒性诱导的大鼠INS-1细胞增殖损伤中的作用。方法:（1）qRT-PCR测定高糖/高脂（high glucose and palmitate,HG/PA）孵育不同时间点INS-1细胞（大鼠胰岛β细胞株）中LEGLTBC表达。抑制或过表达LEGLTBC后,EDU染
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目的:本研究中,我们拟探索长链非编码RNA-LEGLTBC（long non-coding RNA,lnc RNA-LEGLTBC）在糖脂毒性诱导的大鼠INS-1细胞增殖损伤中的作用。方法:（1）qRT-PCR测定高糖/高脂（high glucose and palmitate,HG/PA）孵育不同时间点INS-1细胞（大鼠胰岛β细胞株）中LEGLTBC表达。抑制或过表达LEGLTBC后,EDU染色和CCK-8检测HG/PA孵育下INS-1细胞增殖。（2）生物信息学软件RNA22 V2和Reg RNA 2.0预测LEGLTBC与mi R-199a-3p存在结合。双荧光素酶报告检测两者结合能力。qRT-PCR测定HG/PA孵育不同时间点INS-1细胞中mi R-199a-3p表达。过表达或敲除LEGLTBC后,qRT-PCR测定mi R-199a-3p表达。降低mi R-199a-3p表达后,EDU染色和CCK-8检测HG/PA孵育下INS-1细胞增殖。（3）生物信息学软件Targetscan预测mi R-199a-3p与Fox M1存在结合。双荧光素酶报告检测两者结合能力。免疫印迹测定HG/PA孵育不同时间点以及敲减mi R-199a-3p后INS-1细胞中Fox M1蛋白表达。沉默Fox M1后,测定细胞周期蛋白Cyclin D1在HG/PA孵育的INS-1细胞中的表达,以及采用Ed U染色和CCK-8测定INS-1细胞增殖能力。（4）过表达或沉默LEGLTBC后,免疫印迹测定HG/PA孵育的INS-1细胞Fox M1表达。过表达LEGLTBC或过表达LEGLTBC+沉默Fox M1,免疫印迹测定HG/PA孵育的INS-1细胞Fox M1和Cyclin D1的表达。结果:（1）qRT-PCR结果显示,对比正常培养条件下的INS-1细胞相比,HG/PA诱导的LEGLTBC表达时间依赖性降低。si RNA抑制LEGLTBC表达加重了HG/PA诱导的INS-1细胞增殖受损。反之,腺病毒过表达LEGLTBC后显著恢复INS-1细胞增殖能力。（2）mi R-199a-3p水平在HG/PA处理的INS-1细胞中,随着HG/PA孵育时间的延长而逐渐升高,与LEGLTBC表达趋势相反。荧光素酶实验表明,mi R-199a-3p模拟物和LEGLTBC-WT导致INS-1细胞中荧光素酶活性明显降低,而与共转染mi R-199a-3p模拟物和LEGLTBC-MUT的细胞中荧光素酶活性无显著影响。此外,LEGLTBC过表达明显下调mi R-199a-3p的表达,沉默LEGLTBC能促进mi R-199a-3p的表达。降低mi R-199a-3p表达可减少HG/PA孵育所诱导的INS-1细胞的增殖减慢。（3）HG/PA孵育的INS-1细胞中Fox M1蛋白表达呈时间依赖性降低。荧光素酶实验表明,共转染mi R-199a-3p模拟物和Fox M1-WT导致INS-1细胞中荧光素酶活性明显降低,而与共转染mi R-199a-3p模拟物和Fox M1-MUT的细胞中荧光素酶活性无显著影响。敲减mi R-199a-3p可升高Fox M1表达。沉默Fox M1表达,细胞周期蛋白Cyclin D1在HG/PA孵育的INS-1细胞表达显著降低。Ed U细胞增殖实验和CCK-8实验亦显示抑制Fox M1的表达后,可加重糖脂毒性诱导的INS-1细胞的增殖和细胞活力损伤。（4）过表达LEGLTBC时Fox M1表达升高,而抑制LEGLTBC表达,Fox M1表达降低。过表达LEGLTBC或过表达LEGLTBC+沉默Fox M1后,LEGLTBC过表达增加了HG/PA处理的INS-1细胞中Fox M1表达,而si-Fox M1转染降低了LEGLTBC触发的Fox M1表达增强。此外,过表达LEGLTBC升高了HG/PA处理的INS-1细胞中细胞周期蛋白cyclin D1的表达,而沉默Fox M1后LEGLTBC过表达的保护作用被抑制。结论:LEGLTBC作为竞争性内源性RNA与mi R-199a-3p相互作用,影响靶基因Fox M1表达,进而调控HG/PA诱导的胰岛β细胞增殖损伤。本研究探讨了lnc RNA在胰岛β细胞糖脂毒性损伤中的作用,揭示了糖脂毒性导致β细胞受损的新机制,为胰岛β细胞保护开辟新的思路。
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