WRKY蛋白的专一识别序列是(T)(T)TGAC(C/T)片段(即W盒)。它们在植物应答生物胁迫或者非生物胁迫的过程中扮演着重要角色。其中WRKY6是很重要的一类基因。实验室前期研究工作,通过Northern blot、染色质免疫共沉淀(ChIP)等实验证明WRKY6在低磷条件下能直接作用于PHO1启动子,并抑制phol基因的表达。本实验欲从蛋白质水平运用DIGE技术筛选受其调控的靶基因。本实验以野生型(WT)、WRKY6过表达植株和WRKY6敲除突变体三种材料进行低磷(3 μM)处理3天,对以上处理材料进行蛋白质组学研究,通过蛋白质提取、双向电泳、胶图分析、质谱鉴定及生物信息学分析,找出它们的差异蛋白,然后分析其差异基因上游是否含有W盒,并筛选出受WRKY6转录因子调控的靶基因。具体结果如下:1.BPP法提取拟南芥叶片蛋白质,得到的蛋白质质量较高,满足研究中后续的蛋白质组学研究,利用GAP考染得到的2-DE图谱重复性好、分辨率较高,质谱鉴定成功率高。得到131个差异表达蛋白点,对其进行一级MALDI TOF和二级MALDI TOF/TOF质谱鉴定,最终112个蛋白质被成功鉴定到。其蛋白的功能可分为14类。差异蛋白主要与碳水化合物的转运和代谢以及蛋白质翻译修饰相关。CELLO分析中发现112个蛋白有58个定位是位于细胞质中的,8个蛋白位于细胞外,3个蛋白位于内膜上,11个蛋白位于外膜上,32个蛋白位于周质空间。2.对鉴定成功的差异蛋白进行代谢途径分析,它们主要集中在光合作用中碳固定以及乙醛酸和羧酸代谢、糖酵解/糖异生、氮代谢、戊糖磷酸化、谷胱甘肽代谢等途径中。3.对WRKY6过表达植株中差异蛋白基因启动子W盒结合元件分析,发现基因上游有4个盒元件的序列共有4个基因,基因上游有3个盒元件的共有3个基因基因上游有2个盒元件的共有6个基因,基因上游1个盒元件26个基因,。4.荧光定量分析结果表明,在过表达植株叶片中,蛋白表达量和基因表达量都上调的有OL14翻译控制肿瘤样蛋白、OL17富含甘氨酸RNA结合蛋白8、OL27腈水解酶1、OL47ATP合成酶γ链。在过表达植株的根中,蛋白表达量和基因表达量都上调的有OR4苹果酸脱氢酶、OR12色氨酸合成酶α链和OR19线粒体伴侣蛋白(HSP60)。在过表达植株根中,蛋白表达量和基因表达量都下调的有OR6 Jacalin类凝集素结构域蛋白。