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目的:重组腺病毒(rAd)是常用的基因治疗载体,但它缺乏嗜肝性,本课题通过改造rAd纤毛结构,拟构建出具有嗜肝性的rAd载体,用于肝病靶向基因治疗。方法:以目前常用的rAd高表达载体系统AdEasy System为基础,用乙型肝炎病毒(HBV)衣壳蛋白中具有天然嗜肝性的肽段PreS1的21-47位氨基酸的编码基因(preS1),定点克隆至AdEasy System中骨架质粒pAdEasy-1的HI Loop编码基因位点,构建出重组骨架质粒pAdEasy-1-preS1 ,再用pAdEasy-1-preS1与穿梭质粒pShuttle- IRES-hrGFP-1同源重组成病毒质粒pAd-pres1,经转染HEK293细胞后包装生成重组腺病毒基因治疗载体rAd-PreS1。1结果:克隆了preS1基因片段的腺病毒重组子经测序显示基因序列正确;病毒质粒转染HEK293细胞,一周后进行荧光观察发现其表达出荧光蛋白,提示有腺病毒生成;以重组腺病毒基因为模板行PCR检测能提取嗜肝性基因片段preS1;抽提重组腺病毒蛋白用免疫印迹法能检测到目标蛋白PreS1(21-47)的表达,提示有重组腺病毒基因治疗载体rAd-PreS1的生成;用构建的rAd-PreS1感染多种细胞,病毒滴度检测显示对肝细胞具有相对嗜向性。结论:在rAd纤毛球域HI Loop的编码基因位点插入HBV表面蛋白中嗜肝性片段PreS1的21-47位氨基酸的编码基因preS1,经HEK293细胞包装生成的重组腺病毒基因治疗载体rAd-PreS1,通过体外细胞实验显示对肝细胞具有相对嗜向性。