水产品中孔雀石绿残留的快速检测技术研究

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水产品中的渔药残留问题是影响水产品质量安全的重要因素,近年来,渔药残留的问题越来越严重,危害到人类身体健康以及水产品的贸易交易。因此引起了社会各界广泛的关注。孔雀石绿是渔药残留中具有代表性的一种,它的功能团三苯甲基可以致癌,所以全球很多癌症机构都将它列为致癌物。由于孔雀石绿的致癌危害,使得它已成为水中品中最具代表性的渔药残留之一。目前很多国家已经明确的禁用孔雀石绿,但是由于鱼类预防疾病的需要,很多养殖者还是会在养殖过程中滥用孔雀石绿这类禁用药物,伴随着鱼类的代谢,这些药物会沉积在它们体内,人类食用了这些孔雀石绿残留超标的鱼肉就会造成人体的疾病。传统的检测方法为仪器检测法,虽然灵敏度高,但是耗时长、操作复杂,需要专业人员才能检测。为了营造一个良好的水产养殖环境,健全一个质量安全的保障体系,本研究着重开发操作简单、灵敏快捷、成本低廉的检测水产品中孔雀石绿残留的技术和产品。本文主要研究内容与结论如下:本文的一种研究方法是免疫金银染色法,用胶体金标记孔雀石绿抗体作为标记物,检测线上是孔雀石绿抗原,质控线上是羊抗小鼠二抗,通过一些列参数的优化,制备胶体金免疫层析试纸条,然后用银染色增强显色,从而提高灵敏度。实验选用的标记抗体的胶体金是直径为20nm的胶体金,最佳蛋白结合量是15μg孔雀石绿抗体需要结合1 mL胶体金。吸取20μL标记完成的并稀释10倍的抗体,固定到玻璃纤维膜上作为金标垫。玻璃纤维膜用PBS(0.01 M,10%蔗糖,0.05%吐温-20)预处理过。检测线上的抗原浓度是与3 mg/mL,质控线上的二抗浓度为0.7 mg/mL。用免疫金银染色法放大显色信号,制备的试纸条检出限可达0.2 ng/mL,并成功用于实际鱼样中孔雀石绿的检测。本测试在20min中内可全部完成,室温下稳定性和重现性良好,可在室温环境下保存90 d,为快速检测水产品中孔雀石绿残留提供了一个新的思路。本研究的第二种方法是电化学方法,用石墨烯修饰玻碳电极,并且在检测液中添加表面活性剂增强灵敏度。实验中优化后的缓冲液pH为7.0、扫描速度0.1 V/s、选择的表面活性剂SDS浓度为1.2×10-5M、富集时间350s、富集电压-0.3 V等。干扰实验中电流信号改变小于10%,表明对MG具有比较好的选择性。结果:300倍浓度的Mg2+、Fe2+、Fe3+、Al3+、Na+、K+、Zn2+、Ca2+;200倍浓度的蔗糖、尿素、维生素E;50倍浓度的抗坏血酸、尿酸对50μg/L的MG电流不产生干扰。当MG在7~3000μg/L,MG浓度和氧化峰值电流有比较好的线性关系。校准曲线方程:ip=0.543 c+0.186,R2=0.993(c的单位为mg/L, ip的单位为μA)。最低检测限为3μg/L。本文制备的免疫金银染色试纸条和基于石墨烯修饰玻碳电极的电化学传感器可以实现水产品中孔雀石绿的定性、定量检测,能够满足不同层次的现场快速检测需求,具有广阔的市场前景。
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