论文部分内容阅读
目的:在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKIs)吉非替尼(Gefitinib,Gef)敏感细胞PC9及耐药细胞PC9/G中,研究海带提取物岩藻黄质(Fucoxanthin,FX)、鹅掌菜酚(Eckol,EC)对吉非替尼敏感性的影响及其分子机制。方法:体外培养NSCLC细胞PC9、PC9/G,将细胞分为对照组、Gef组、FX 组、EC 组、FX 联用 Gef(FX+Gef)组以及 EC 联用 Gef(EC+Gef)组。CCK8法检测药物对PC9、PC9/G细胞存活率的影响。构建人非小细胞肺癌PC9细胞裸鼠移植瘤模型,体内水平考察FX、EC单用及与Gef联用后对肿瘤生长的影响。免疫组化法检测肿瘤组织中Ki67的表达。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测药物对PC9、PC9/G细胞凋亡率的影响。单丹磺酰戊二胺(Monodansylcadaverine,MDC)染色法检测药物处理后PC9、PC9/G细胞自噬水平的变化。Western blotting法检测药物处理后,PC9、PC9/G细胞中自噬相关蛋白p62、BECN、LC3B以及耐药相关信号通路蛋白的表达。结果:Gef对PC9、PC9/G细胞的半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration,IC50)分别为 0.028±0.011μM、6.440±1.532μM,与 PC9 细胞相比,PC9/G细胞的吉非替尼耐药倍数达322。本研究选用的细胞符合Gef敏感细胞、耐药细胞株的特征。在PC9、PC9/G细胞中,Gef、FX、EC单用以及联用对PC9、PC9/G细胞均有增殖抑制作用(P<0.05)。在PC9细胞裸鼠移植瘤模型中,与空白对照组相比,各给药组的肺癌肿瘤生长减慢,且与各单用药物组相比,FX+Gef、EC+Gef联用组肿瘤抑制效应更为显著。反映肿瘤组织增殖能力的Ki67染色结果趋势相同;且FX、EC单用或与Gef联合用药后荷瘤动物体重下降不明显。与Gef组相比,FX/EC与Gef联用可显著提高PC9、PC9/G细胞凋亡率(P<0.05)。MDC结果显示,PC9/G细胞较PC9细胞自噬水平显著上升(P<0.05);在PC9/G细胞中,与空白对照组相比,FX、EC单用组以及联用组的细胞自噬水平降低。且与Gef组相比,FX/EC+Gef联用可显著抑制PC9/G细胞自噬(P<0.05)。Western blotting结果显示,FX/EC与Gef联用可调控PC9/G细胞自噬相关蛋白,下调受体酪氨酸激酶EGFR、AXL的表达,抑制耐药相关的MEK/ERK信号通路。结论:海带提取物FX、EC可在体内外水平提高NSCLC细胞对Gef的敏感性,其作用机制可能是通过诱导凋亡、抑制细胞自噬、调控EGFR/AXL-MEK-ERK信号通路而实现。