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目的研究以关节腔作为组织工程软骨培养环境的可行性;并明确骨髓间充质干细胞在组织工程软骨培养中的作用。材料与方法新西兰大白兔90只,月龄6～8个月,体重2.5～4.0kg,雄性。随机分为A、B、C三组,每组30只。A组为单纯脱钙骨组,30只动物膝关节腔内分别植入骨膜包裹的脱钙骨,于第8w,10w,12w各取10只标本观察;B组为脱钙骨+软骨细胞组,将体外培养好的同种异体关节软骨负载在脱钙骨载体上,骨膜包裹后植入30只动物的关节腔内,分别于第8w,10w,12w各取10只标本观察;C组为脱钙骨+软骨细胞与骨髓间充质干细胞共培养组,将体外培养的同种异体关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养24h后,负载在脱钙骨基质上,骨膜包裹后植入30只动物的膝关节腔内,并分别于第8w,10w,12w各取10只标本观察。移植手术在显微操作下进行骨膜包裹和关节腔缝合固定。术后标本观察采用H-E染色和甲苯胺蓝染色观察软骨细胞的状态和活性,并记录每高倍镜(10x40)下标本中甲苯胺蓝染色阳性的软骨细胞个数;细胞个数记录以每个标本三人分别观察计数后取平均值。数据录入和分析采用SPSS vl4.0版统计学软件。计量资料以均数±标准差(x±s)表示。不同处理的组间比较采用One-way ANOVA并进行One-wayANOVA Post Hoc Tests(Dunnett)进行组间比较。结果C组(脱钙骨+软骨细胞+骨髓间充质干细胞共培养组):HE染色移植8周后软骨细胞已开始增生,细胞代谢活跃,胞体增大,核染色增强;12周时已呈透明软骨样,软骨陷窝形成,周围大量细胞基质围绕;已见不到明显的载体结构。甲苯胺蓝染色8周软骨细胞已开始增生,细胞代谢活跃,胞体增大,大多数细胞核染色呈紫蓝色;已有少量基质分泌。12周时甲苯胺蓝染色阳性细胞明显多于A、B组,细胞排列成串状或团状,细胞核染色呈深蓝色,软骨陷窝形成。B组(脱钙骨+软骨细胞组)和A组(单纯脱钙骨组):HE染色8周时标本中只见少量的移植细胞分散排列在载体结构内,大部分标本中细胞开始萎缩,载体结构完整。B组12周时载体内软骨细胞增殖较弱,软骨细胞大部分呈三角形或梭形,排列稀疏。软骨细胞分泌的软骨基质较少,呈网状分布,未融合成片,未见成熟软骨陷窝形成。甲苯胺蓝染色12周时B组标本载体内软骨细胞数量少,单个排列,排列稀疏,核染色较淡,无软骨陷窝形成。A组中12周时绝大多数标本细胞偶可见核染色深蓝色的软骨细胞。各组甲苯胺蓝染色阳性细胞计数,8w,10w,12w周时统计结果显示C组均明显多于A、B组,有显著统计学差异(p＜0.01)。结论膝关节腔是组织工程软骨理想的培养环境,“腔内培养,腔内移植”的理念具有可行性,为组织工程软骨的发展提供了新的思路。