不同类型钙蛋白酶抑制剂对肿瘤微环境下C2C12小鼠成肌细胞AP-1、PARP表达的影响

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[目的]观察Calpastatin Peptide、Calpain Inhibitor IV和Calpeptin三种钙蛋白酶抑制剂对肿瘤微环境下C2C12小鼠成肌细胞内AP-1、PARP总蛋白的表达及m RNA相对表达的影响,探索钙蛋白酶抑制剂的作用机制。[方法]6孔板内架置4个transwell小室,利用此双层结构共培养CT26细胞及C2C12细胞,将共培养细胞按照药物干预方案分组:Calpastatin Peptide组(Cal P组)、Calpain Inhibitor IV组(Cal4组)、Calpeptin组(Cal组)、DMSO双层培养组(Dm D组)、DMSO单层培养组(Dm S组);各实验组细胞药物干预后分别培养6h、12h、24h、48h、72h;免疫组化法(PV9000二步法)检测其中C2C12细胞内AP-1、PARP总蛋白的表达情况;QPCR法(实时荧光定量聚合链式反应)检测其中C2C12细胞内AP-1、PARP m RNA的相对表达情况。[结果]免疫组化:Cal P在6h-24h下调AP-1总蛋白表达,Cal4在24h下调AP-1总蛋白表达;Cal P、Cal4、Cal作用后PARP总蛋白表达未见明显改变;QPCR:Cal P、Cal4在6h、12h、48h、72h下调AP-1 m RNA表达,Cal可下调AP-1 m RNA表达,Cal P在6h上调PARP m RNA表达,在12h、72h下调PARP m RNA表达,Cal4在12h、24h、72h下调PARP m RNA表达,Cal在48h上调PARP m RNA表达,在12h、72h下调PARP m RNA表达。[结论]钙蛋白酶抑制剂可下调AP-1的表达,生物学效应上表现为抗肿瘤;钙蛋白酶抑制剂作用与否与PARP表达无明显关联性。
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