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本研究以我国北方重要海水养殖鱼类红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）为研究对象,在研究红鳍东方鲀幼鱼支链氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸）的营养需求基础上,进一步探讨红鳍东方鲀对饲料中支链氨基酸之间可能交互作用的响应,以期阐明红鳍东方鲀利用饲料不同水平支链氨基酸的特点,为红鳍东方鲀配合饲料精准设计提供理论依据。研究包括四个部分:1.红鳍东方鲀幼鱼异亮氨酸营养需求研究本实验通过研究饲料中不同水平的异亮氨酸对红鳍东方鲀幼鱼生长指标、蛋白质利用及血清和肌肉中游离氨基酸含量的影响,探讨红鳍东方鲀对异亮氨酸的最适需求量。在基础饲料中分别添加晶体异亮氨酸制成6组等氮等脂饲料,各组异亮氨酸的实际水平分别为1.23%、1.47%、1.61%、1.98%、2.17%、2.31%,对初始体重约为（29.00±0.01）g的红鳍东方鲀幼鱼进行10周的喂养试验,每种饲料处理设3个重复,每个重复35尾鱼。结果表明:随异亮氨酸在试验饲料中含量增加,蛋白质沉积率（PPV）表现为先升高后下降趋势,在1.98%及2.17%组达到最高,显著高于1.23%组（P<0.05）;全鱼粗蛋白质含量的趋势表现为先上升后下降,在1.61%、1.98%及2.17%组达到最高,显著高于1.23%组（P<0.05）;血清游离异亮氨酸含量随饲料异亮氨酸水平表现为先升高,后达到平台期;随着饲料异亮氨酸水平的增加,肌肉中游离异亮氨酸含量呈现明显的先降低后升高的趋势;随饲料中异亮氨酸水平对生长率、饲料利用能力、肥满度、肝体比、脏体比无显著性影响（P>0.05）。以蛋白质沉积率、鱼体蛋白质含量作为评价指标,根据二次回归曲线得到,红鳍东方鲀幼鱼对异亮氨酸需求量为饲料的1.83%～1.96%,相当于饲料蛋白质的4.07%～4.36%。2.不同水平缬氨酸对红鳍东方鲀幼鱼生长性能、支链氨基酸代谢相关酶活性及肠道氨基酸和小肽转运载体表达的影响本实验以鱼粉、花生粕和明胶为蛋白源,鱼油和豆油为脂肪源配置基础饲料,在此基础上,添加0%、0.6%、1.2%、1.8%、2.4%、3.0%的晶体缬氨酸配置成半精制实验饲料（实际缬氨酸含量为1.09%、1.52%、2.05%、2.52%、3.14%、3.63%）。以初始体重为（24.7±0.3）g的红鳍东方鲀幼鱼为实验对象,进行8周养殖实验。结果表明:随饲料缬氨酸水平上升,增重率、特定生长率、饲料效率、蛋白质效率和蛋白质沉积率均呈现先增长后下降的趋势,并在2.52%组达到最大值;鱼体粗蛋白含量在2.52%组达到最大值（P<0.05）;肥满度和肝体比随饲料缬氨酸的升高呈现出先上升后趋于平缓的趋势,在2.52%组达到最大值;随饲料缬氨酸水平上升,肌肉缬氨酸含量呈现出先升高后降低的趋势;饲料缬氨酸2.52%组的肌肉支链氨基酸转氨酶（BCAT）和肝脏支链α-酮酸脱氢酶（BCKDH）活性最高（P<0.05）,饲料缬氨酸3.14%组肝脏支链α-酮酸脱氢酶激酶（BCKDHK）活性最高（P<0.05）;饲料缬氨酸水平过高时不仅显著抑制肠道中性氨基酸转运载体B0AT1表达,也抑制了PAT1、y+LAT2和EAAT3非中性氨基酸和小肽转运载体Pep T1的基因表达（P<0.05）。分别以特定生长率、饲料效率和蛋白质效率作为评价指标,通过折线模型和二次曲线模型拟合得到红鳍东方鲀幼鱼的缬氨酸需求量为饲料的2.42%～2.90%,占饲料蛋白质的5.41%～6.49%。3.不同水平亮氨酸对红鳍东方鲀幼鱼生长性能、肌肉和血清游离氨基酸含量及TOR信号通路相关基因表达的影响在基础饲料中依次添加0%、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%、2.0%的晶体亮氨酸,配置成6组等氮等能的实验饲料,饲料亮氨酸的实测水平分别为1.93%、2.49%、2.86%、3.26%、3.63%、4.07%。对初始体重为（28.97±0.02）g的红鳍东方鲀幼鱼进行10周养殖实验。结果表明:饲料亮氨酸水平对红鳍东方鲀幼鱼生长性能、饲料利用无显著性影响（P>0.05）;对鱼体化学组成和形体指标也无显著性影响（P>0.05）;饲料亮氨酸2.86%组肌肉游离苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和脯氨酸含量显著上升（P<0.05）;饲料亮氨酸4.07%组血清游离天冬氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸和亮氨酸含量显著上升（P<0.05）;饲料亮氨酸水平过量显著抑制TOR和S6K1在肌肉中的表达,随饲料亮氨酸含量上升,4E-BP1基因表达水平呈现先上升后下降的趋势;饲料亮氨酸水平上升使肠道小肽转运载体基因Pep T1显著下调（P<0.05）。综上所述,尽管饲料不同水平亮氨酸不影响红鳍东方鲀的生长,但是过量亮氨酸会使血清和肌肉游离亮氨酸升高,并抑制肌肉TOR信号通路相关基因表达。4.红鳍东方鲀对饲料中的亮氨酸及与其他支链氨基酸拮抗作用的研究本实验以支链氨基酸亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸适宜水平组为对照组,设计饲料低亮氨酸水平组,记作Leu-L;高亮氨酸水平组,记作Leu-H;高异亮氨酸水平组,记作Ile-H;以及高缬氨酸水平组,记作Val-H。对初始体重为（24.2±0.3）g的红鳍东方鲀进行8周养殖实验。结果表明:饲料支链氨基酸含量过高对红鳍东方鲀生长和饲料利用无显著影响（P>0.05）,Leu-L组与Leu-H组生长性能无显著性差异（P<0.05）;鱼体粗蛋白和粗脂肪含量无显著性差异（P>0.05）;Leu-H组肝体比和肥满度显著高于对照组（P<0.05）;Val-H组肌肉的硬度、粘附性、弹性和胶粘性有显著低于对照组（P<0.05）;与对照组相比,饲料高亮氨酸、异亮氨酸或缬氨酸组,肌肉和血清中剩余2种游离支链氨基酸含量没有显著下降（P>0.05）;与其他组相比,对照组肝脏支链α-酮酸脱氢酶（BCKDH）和支链α-酮酸脱氢酶激酶（BCKDHK）活性更低（P<0.05）;饲料过量亮氨酸或过量缬氨酸均可以显著激活TOR信号通路（P<0.05）;与其他组相比,对照组和Leu-L组肠道氨基酸转运载体和小肽转运载体转录水平更高（P<0.05）。综上所述,饲料中亮氨酸水平对红鳍东方鲀幼鱼生长无显著影响,红鳍东方鲀对饲料不同亮氨酸水平有较高耐受性,对支链氨基酸交互作用的分析表明支链氨基酸拮抗作用不明显。