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目的:
通过对川楝子、小茴香及两药配伍后主成分的药代动力学研究,及给药后大鼠生化指标测定和病理切片观察,探讨川楝子配伍小茴香减毒机制。
方法:
1.分别建立川楝子提取物主成分川楝素和小茴香提取物主成分反式茴香脑的HPLC测定方法并测定含量;
2.分别建立大鼠血浆和肝、脑组织中川楝素浓度的高效液相色谱与质谱联用法(LC-MS/MS)测定方法,及大鼠血浆中反式茴香脑浓度的气相色谱与质谱连用(GC-MS/MS)测定方法,进行方法学验证,依据建立的方法考察川楝子、小茴香和两药配伍后主成分的药代动力学特点;
3.川楝子、小茴香和两药配伍后灌胃大鼠,测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)等指标,观察肝脏病理切片,考察小茴香对川楝子的减毒作用;
结果:
1.建立了川楝素和反式茴香脑的高效液相色谱(HPLC)测定方法,经验证该方法安全、可靠,可用于药材提取物的含量测定,经测定川楝子提取物中川楝素含量为815.8μg·mL-1;小茴香提取物中反式茴香脑含量为14.17mg·mL-1。
2.建立了大鼠血浆中川楝素的LC-MS测定方法,采用高效液相色谱和质谱连用仪,流动相为乙腈-0.01%甲酸水溶液,质谱扫描方式为多反应监测(MRM),离子化方式为ESI(电喷雾离子源)负离子模式,川楝素的m/z573.4→m/z531.5,对乙酰氨基酚(内标)的m/z149.9→m/z107.1;该方法系统适用性、线性关系、专属性、稳定性、回收率和基质效应均符合生物样品检测要求,可用于大鼠血浆药物浓度的检测;大鼠灌胃低、中、高剂量川楝子提取物,不同时间点采集血样测定,得浓度-时间(C-T)曲线并计算药代动力学参数,结果显示低中剂量组与高剂量组相比最大血药浓度(Cmax)、药时曲线下面积(AUC(0-t))、清除率(CLz/F)、表观分布容积(Vz/F)有显著性差异,低中剂量组各参数无显著性差异;C-T曲线中观察到低剂量组在6小时左右血药浓度有小幅度升高,中高剂量组在2小时左右有升高。
3.建立了大鼠血浆中反式茴香脑的GC-MS测定方法,采用气相色谱与质谱联用仪;载气为高纯氦气;质谱采用电轰击离子源(EI);反式茴香脑定量特征碎片中目标离子m/z为148,参考离子m/z为117;甲基丁香酚定量特征碎片中目标离子m/z为178,参考离子m/z为163;该方法系统适用性、线性关系、专属性、稳定性、回收率和基质效应均符合生物样品检测要求,可用于大鼠血浆中反式茴香脑浓度的检测;大鼠灌胃低、中、高三种剂量小茴香提取物后,不同时间点采集血样测定,得C-T曲线并计算药代动力学参数,结果显示低中剂量组与高剂量组相比Cmax、AUC(0-t)、CLz/F、Vz/F有显著性差异,低中剂量组各参数无显著性差异;C-T曲线中观察到低、高剂量组在6h左右血药浓度有小幅度升高,中剂量组有在2h和6h左右均升高。
4.大鼠灌胃川楝子、小茴香、川楝子和小茴香(1∶1)提取物后,血样处理后测得C-T曲线并计算药代动力学参数,结果显示配伍组反式茴香脑药代参数Cmax、AUC(0-t)明显升高,CLz/F、Vz/F明显降低,t1/2z升高;川楝素药代参数Cmax、AUC(0-t)明显降低,平均滞留时间MRT(0-t)、MRT(0-∞)明显缩短。
5.大鼠肝、脑组织中川楝素含量测定方法安全、可靠、稳定、灵敏,结果显示在1h时川楝素浓度最高点处脑部分布较血及肝组织中分布多,在2h之后肝组织中比血及脑组织中浓度更高,川楝素在肝中有一定蓄积。
6.模型大鼠单次灌胃川楝子(60g生药/kg)后AST、ALT、DBIL、TBIL、IBIL值与正常大鼠相比均升高,且有显著性差异,肝脏病理切片显示产生肝损伤,配伍小茴香后连续给药后,相比单独川楝子组生化指标变化减小,且肝组织病理切片损伤减小。
结论:
1.川楝子主成分川楝素的LC-MS测定方法和小茴香主成分反式茴香脑GC-MS测定方法经验证安全可靠,可用于大鼠血浆中川楝素和反式茴香脑浓度的测定。
2.川楝子、小茴香单独及配伍后药代动力学结果显示,配伍后可减少大鼠血浆中川楝素浓度,并增加血浆中反式茴香脑浓度。
3.川楝素在肝内易蓄积,配伍小茴香后可减轻川楝子造成的肝毒性。
通过对川楝子、小茴香及两药配伍后主成分的药代动力学研究,及给药后大鼠生化指标测定和病理切片观察,探讨川楝子配伍小茴香减毒机制。
方法:
1.分别建立川楝子提取物主成分川楝素和小茴香提取物主成分反式茴香脑的HPLC测定方法并测定含量;
2.分别建立大鼠血浆和肝、脑组织中川楝素浓度的高效液相色谱与质谱联用法(LC-MS/MS)测定方法,及大鼠血浆中反式茴香脑浓度的气相色谱与质谱连用(GC-MS/MS)测定方法,进行方法学验证,依据建立的方法考察川楝子、小茴香和两药配伍后主成分的药代动力学特点;
3.川楝子、小茴香和两药配伍后灌胃大鼠,测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)等指标,观察肝脏病理切片,考察小茴香对川楝子的减毒作用;
结果:
1.建立了川楝素和反式茴香脑的高效液相色谱(HPLC)测定方法,经验证该方法安全、可靠,可用于药材提取物的含量测定,经测定川楝子提取物中川楝素含量为815.8μg·mL-1;小茴香提取物中反式茴香脑含量为14.17mg·mL-1。
2.建立了大鼠血浆中川楝素的LC-MS测定方法,采用高效液相色谱和质谱连用仪,流动相为乙腈-0.01%甲酸水溶液,质谱扫描方式为多反应监测(MRM),离子化方式为ESI(电喷雾离子源)负离子模式,川楝素的m/z573.4→m/z531.5,对乙酰氨基酚(内标)的m/z149.9→m/z107.1;该方法系统适用性、线性关系、专属性、稳定性、回收率和基质效应均符合生物样品检测要求,可用于大鼠血浆药物浓度的检测;大鼠灌胃低、中、高剂量川楝子提取物,不同时间点采集血样测定,得浓度-时间(C-T)曲线并计算药代动力学参数,结果显示低中剂量组与高剂量组相比最大血药浓度(Cmax)、药时曲线下面积(AUC(0-t))、清除率(CLz/F)、表观分布容积(Vz/F)有显著性差异,低中剂量组各参数无显著性差异;C-T曲线中观察到低剂量组在6小时左右血药浓度有小幅度升高,中高剂量组在2小时左右有升高。
3.建立了大鼠血浆中反式茴香脑的GC-MS测定方法,采用气相色谱与质谱联用仪;载气为高纯氦气;质谱采用电轰击离子源(EI);反式茴香脑定量特征碎片中目标离子m/z为148,参考离子m/z为117;甲基丁香酚定量特征碎片中目标离子m/z为178,参考离子m/z为163;该方法系统适用性、线性关系、专属性、稳定性、回收率和基质效应均符合生物样品检测要求,可用于大鼠血浆中反式茴香脑浓度的检测;大鼠灌胃低、中、高三种剂量小茴香提取物后,不同时间点采集血样测定,得C-T曲线并计算药代动力学参数,结果显示低中剂量组与高剂量组相比Cmax、AUC(0-t)、CLz/F、Vz/F有显著性差异,低中剂量组各参数无显著性差异;C-T曲线中观察到低、高剂量组在6h左右血药浓度有小幅度升高,中剂量组有在2h和6h左右均升高。
4.大鼠灌胃川楝子、小茴香、川楝子和小茴香(1∶1)提取物后,血样处理后测得C-T曲线并计算药代动力学参数,结果显示配伍组反式茴香脑药代参数Cmax、AUC(0-t)明显升高,CLz/F、Vz/F明显降低,t1/2z升高;川楝素药代参数Cmax、AUC(0-t)明显降低,平均滞留时间MRT(0-t)、MRT(0-∞)明显缩短。
5.大鼠肝、脑组织中川楝素含量测定方法安全、可靠、稳定、灵敏,结果显示在1h时川楝素浓度最高点处脑部分布较血及肝组织中分布多,在2h之后肝组织中比血及脑组织中浓度更高,川楝素在肝中有一定蓄积。
6.模型大鼠单次灌胃川楝子(60g生药/kg)后AST、ALT、DBIL、TBIL、IBIL值与正常大鼠相比均升高,且有显著性差异,肝脏病理切片显示产生肝损伤,配伍小茴香后连续给药后,相比单独川楝子组生化指标变化减小,且肝组织病理切片损伤减小。
结论:
1.川楝子主成分川楝素的LC-MS测定方法和小茴香主成分反式茴香脑GC-MS测定方法经验证安全可靠,可用于大鼠血浆中川楝素和反式茴香脑浓度的测定。
2.川楝子、小茴香单独及配伍后药代动力学结果显示,配伍后可减少大鼠血浆中川楝素浓度,并增加血浆中反式茴香脑浓度。
3.川楝素在肝内易蓄积,配伍小茴香后可减轻川楝子造成的肝毒性。