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研究目的: 1 建立成人外周血来源的单个核细胞体外培养、鉴定内皮前体细胞(EPCs)的方法,以及其在抗原表达方面的生物学特性。 2 探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员后外周血干细胞对糖尿病足综合征的疗效,对重症高位动脉闭塞下肢血管充盈改善及新增侧枝循环的情况,同时初步评价该方法对下肢周围神经损伤的修复作用。 3 探讨自体外周血干细胞移植对糖尿病足患者血浆血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)水平的影响 研究方法: 1 采用密度梯度离心的方法处理rhG-CSF动员后的单采标本获取外周血单个核细胞(PBMNCs),在纤维连接素(FN)包备后EGM-2培养基中培养2周,通过免疫表型、活性免疫荧光染色及组织化学染色法鉴定EPCs。 2 应用rhG-CSF(600μg/day)动员第5天以CS3000plus血细胞分离机采集干细胞悬液约50ml,配制成1×108/ml的细胞悬液后,注入患病下肢。注射方法为每间隔3×3cm2注射一针,每针注射0.8~1.0ml,注射范围如仅胫前动脉闭塞行双腓肠肌注射,如同时伴股浅动脉闭塞则双腓肠肌及股三、股四头肌同时注射。于注射前及注射后3个月分