褪黑素抑制结肠癌RKO细胞增殖和迁移及其分子机制

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目的探讨褪黑素(melatonin,Mel)对结肠癌RKO细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其分子机制。方法MTT法检测Mel对RKO细胞增殖的影响,Western blot检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERs)相关蛋白的表达水平,检测Mel受体MT1、MT2的表达水平。细胞划痕实验检测Mel对RKO细胞迁移的影响,检测肌球蛋白轻链激酶(mitogen activated protein kinases,MLCK)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达水平。检测丝裂原活化的蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)信号转导通路相关蛋白,并且加入抑制剂和激活剂研究Mel对其的作用。结果RKO细胞经过Mel处理可以抑制其增殖,同时重链结合蛋白(heavy chainbinding protein,BIP)的表达水平下降、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase3,caspase3)的表达水平上升,表明Mel可以通过内质网应激途径促进RKO细胞凋亡。Mel可以诱导RKO细胞中MT1的表达上升,对MT2无诱导作用。Mel可以抑制RKO细胞迁移,并且可以抑制MLCK和OPN的表达,RKO细胞的迁移能力与MLCK和OPN的表达下降有关。通过对MAPK通路蛋白的检测发现,Mel上调细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extra cellular signal-regulated protein kinase1/2,ERK1/2)的磷酸化水平,下调p38(p38mitogen activated protein kinases,p38)和C-Jun N末端激酶(C-JunN-terminal kinase,JNK)的磷酸化水平,发挥抗肿瘤作用。结论Mel可以通过内质网应激途径诱导RKO细胞凋亡,抑制其增殖,并且通过下调细胞骨架相关蛋白MLCK和OPN的表达水平,抑制RKO细胞迁移,Mel的这些功能可能是通过调节MAPK信号转导通路实现的。
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