“以痛为腧”按揉法对BPI大鼠的疼痛及脑内奖赏系统相关区域GABA和DA的影响

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目的:通过“以痛为腧”按揉法观察推拿对臂丛神经损伤大鼠的镇痛作用以及与情绪相关的脑内的影响因素,探索推拿对于治疗神经病理性疼痛的脑内效应机制,藉此希望通过从脑科学的角度来阐述推拿手法作用的科学依据,并为临床治疗臂丛神经损伤康复提供新思路。方法:135只SD大鼠,随机取出24只作为空白对照组,其余大鼠制作臂丛神经神经损伤模型,造模成功后分为假手术组、模型对照组、轻手法治疗组、重手法治疗组,每组24只。各组在造模前、造模后第3天、推拿治疗第7天、推拿治疗第14天、推拿治疗第21天、推拿治疗第28天进行机械痛阈检测。同时在推拿治疗第7天、推拿治疗第14天、推拿治疗第21天、推拿治疗第28天分别进行高架十字迷宫、旷场实验检测。在推拿治疗第7天、推拿治疗第14天、推拿治疗第21天、推拿治疗第28天后分别在五组之间每组随机选取6只SD大鼠测量血流量后,牺牲取材,左心室灌注取脑,通过石蜡包埋、切片后,对脑内相关核团进行免疫组织组化学染色;观察推拿治疗后,臂丛神经损伤大鼠脑内腹侧被盖区、伏隔核、纹状体中多巴胺和γ-氨基丁酸的阳性表达。结果:①机械痛阈:在造模前,各组之间比较无统计学意义(P>0.05)。在造模完成后的第三天,轻手法治疗组、模型对照组、重手法治疗组与空白对照组对比,差异有统计学意义(P<0.01),模型对照组、轻手法治疗组和重手法治疗组与假手术组均有显著差异(P<0.01);空白对照组与假手术组之间无统计学意义(P>0.05)。推拿治疗第七天后,空白对照组与假手术组有统计学意义(P<0.05),与模型对照组有显著差异(P<0.01),轻手法治疗组、重手法治疗组与空白对照组和假手术组相较均无统计学意义(P>0.05),模型对照组与假手术组、轻手法治疗组、重手法治疗组之间均有统计学意义(P<0.01);轻手法治疗组与重手法治疗组组间无统计学意义(P>0.05)。推拿治疗第十四天后,空白对照组与模型对照组有统计学意义(P<0.01),假手术组与与模型对照组有统计学意义(P<0.01),模型对照组与轻手法治疗组、重手法治疗组之间有统计学意义(P<0.01),轻手法治疗组与重手法治疗组组间无统计学意义(P>0.05)。推拿治疗第二十一天后,模型对照组与空白对照组、假手术组、轻手法治疗组、重手法治疗组对比差异有统计学意义(P≤0.01),轻手法治疗组与空白对照组、假手术组、重手法治疗组差异均无统计学意义(P>0.05)。推拿治疗第二十八天后,空白对照组、轻手法治疗组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);轻手法治疗组与空白对照组、假手术组、重手法治疗组均无统计学意义(P>0.05)。②高架十字迷宫:治疗第七天后,假手术组与模型对照组的开臂进入次数百分比相较,差异具有统计学意义(P<0.05),其余组间对比无统计学意义(P>0.05)。治疗第十四天后和治疗第二十一天后,各组间均无统计学意义(P>0.05)。治疗第二十八天后,模型对照组与假手术组比较,开臂进入次数百分比有统计学意义(P<0.05),其余各组均无统计学意义(P>0.05)。③旷场实验:在推拿治疗7天、14天、21天、28天后,各组大鼠之间在水平移动距离上并无统计学意义(P>0.05)。④皮肤表面血流量:推拿治疗第7天后,各组间皮肤血流量对比差异均无统计学意义(P>0.05)。推拿治疗第14天后,模型对照组与空白对照组、假手术组、轻手法治疗组之间皮肤血流量均有统计学意义(P<0.05),重手法治疗组与模型对照组有统计学意义(P<0.01)。推拿治疗21天后,轻手法治疗组、重手法治疗组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组与假手术组、模型对照组相较有统计学意义(P<0.01)。推拿治疗28天后,空白对照组与模型对照组相比,有统计学意义(P≤0.01);轻手法治疗组与模型对照组皮肤血流量对比,差异有统计学意义(P<0.05)。⑤脑内GABA变化:VTA内GABA的平均光密度值比较中,推拿治疗第7天后,轻手法治疗组与模型对照组对比,差异有统计学意义(P<0.05),重手法治疗组与轻手法治疗组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);推拿治疗第14天后,假手术组、模型对照组与空白对照组对比,比较有统计学意义(P<0.01),重手法治疗组与空白对照组对比有统计学差异(P<0.05);推拿治疗第21天后,假手术组、模型对照组、轻手法治疗组、重手法治疗组与空白对照组对比,差异有统计学意义(P<0.01);推拿治疗第28天后,各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NAc内GABA的平均光密度值比较中,推拿治疗第7天后与推拿治疗第21天后,各组间均无统计学意义(P>0.05);推拿治疗第14天后,空白对照组与模型对照组比较有统计学意义(P<0.05),模型对照组与轻手法治疗组、假手术组相比,差异有统计学意义(P≤0.0.01),轻手法治疗组与重手法治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.05);推拿治疗第28天后,模型对照组与重手法治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。STR内GABA的平均光密度值比较中,推拿治疗第7天后,各组间均无统计学意义(P>0.05);推拿治疗第14天后,轻手法治疗组与模型对照组之间对比,差异有统计学意义(P<0.05);推拿治疗第21天后,空白对照组与模型对照组之间比较,差异有统计学意义(P<0.01),模型对照组与轻手法治疗组、重手法治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.05);推拿治疗28天后,轻手法治疗组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。⑥脑内DA变化:VTA内多巴胺的平均光密度值中比较,推拿治疗第7天后,模型对照组、重手法治疗组与轻手法治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第14天后,各组间无统计学意义(P>0.05);治疗第21天后,假手术组、模型对照组、重手法治疗组与空白对照组之间,差异有统计学意义(P<0.01),轻手法治疗组与空白对照组之间相比差异有统计学意义(P<0.05);治疗第28天后,模型对照组与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),重手法治疗组与空白对照组之间差异有统计学意义(P<0.01),假手术组、轻手法治疗组与重手法治疗组之间,差异有统计学意义(P<0.05)。NAc内多巴胺的光密度平均值比较中,推拿治疗第7天后,各组间无统计学意义(P>0.05);推拿治疗第14天后,模型对照组与空白对照组比较,有统计学意义(P<0.01),重手法治疗组与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);推拿治疗第21天后,假手术组、模型对照组、重手法治疗组与空白组对比,有统计学意义(P<0.01),重手法治疗组、假手术组、模型对照组与轻手法治疗组相比,差异有统计学意义(P<0.01);推拿治疗第28天后,空白对照组、假手术组与模型对照组比较,有统计学意义(P<0.05),轻手法治疗组与重手法治疗组对比差异有统计学意义(P<0.05),轻手法治疗组与模型对照组对比差异有统计学意义(P<0.01)。STR内多巴胺的平均光密度值比较中,推拿治疗第7天后,各组比较无统计学意义(P>0.05);推拿治疗第14天后,空白对照组、轻手法治疗组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),重手法治疗组、假手术组与模型对照组对比,差异有统计学意义(P<0.05);推拿治疗第21天后,空白对照组与模型对照组比较,有统计学意义(P<0.05);推拿治疗第28天后,各组间无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)“以痛为腧”按揉法可以提高臂丛神经损伤大鼠的缩足性机械痛阈值,表明“以痛为腧”按揉法有明显缓解大鼠神经病理性慢性疼痛的作用,轻、重手法无明显区别。(2)“以痛为腧”按揉法能够有效提升臂丛神经损伤大鼠脑内腹侧被盖区、伏隔核、纹状体的GABA和DA的含量,可推测“以痛为腧”按揉法的作用机制可能与脑内相关奖赏系统的核团参与有关,且轻手法优于重手法。(3)本研究表明在施用“以痛为腧”按揉法干预时,轻手法的效果优于重手法,提示轻手法可能更适合长期治疗缓解大鼠神经病理性慢性疼痛、降低大鼠的焦虑程度。
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