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第一部分HLAII类基因多态性与乙脑灭活疫苗诱导的抗体应答的关系背景:人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)系统分为HLA I类,III类和Ⅱ类3个基因区,是人体重要的免疫遗传体系。其中HLAⅡ类基因区结构最为复杂。经典的HLAII类基因包括HLA-DR、DQ、DP,其编码产物可将外源性抗原呈递给CD4+T细胞,活化B细胞分化为浆细胞产生特异性抗体。在此过程中,非经典的HLA II类基因HLA-DM的编码产物可调控HLA II类分子与抗原肽结合,从而影响抗原提呈的效率。HLAII类基因存在着广泛的多态性,其多态性决定了 HLAⅡ类分子抗原结合槽特性,从而影响抗原肽的呈递,与疫苗的免疫应答密切相关。目的:以灭活乙型脑炎疫苗(Japanese encephalitis vaccine,JEV)接种后所诱导的不同抗体水平的个体为研究对象,通过HLA II类基因多态性与JEV诱导的抗体水平的相关性分析,寻找与乙脑抗体应答相关的HLA分子,初步探讨HLAII类基因系统在灭活疫苗所诱导的抗体反应性中的作用。方法:根据抗体阳转水平,随机挑选JEV接种的儿童,纳入抗体阳转组和抗体阴性组,深度测序(next generation sequencing,NGS)进行 HLA-DRB1,-DQA1,-DQB1,-DPA1,-DPB1分型,Sanger和TA克隆测序进行HLA-DMA,-DMB分型,计算基因频率并构建单倍型。比较组间基因频率、单倍型频率和分子锚定残基差异;分析抗体阳转组几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)与HLAII类基因的相关性,并对与抗体应答相关的HLA Ⅱ类分子进行抗原肽预测。结果:(1)HLAII类基因等位基因关联分析结果显示:HLA-DQB1*02:01在阳转组中的频率高于阴性组(0.156 vs 0.075,OR=2.267,95%CI 为 1.285-3.999,P_adj=0.018),而DQB1*02:02在阳转组中的频率低于阴性组(0.014vs 0.095,OR=0.131,95%CI为 0.047-0.400,P_adj=0.0002)。(2)单倍型关联分析结果显示:单倍型DRB1*07:01-DQA1*02:01-DQB1*02:01-DPA1*01:03-DPB1*04:01(P_adj<0.001),DQA1*02:01-DQB1*02:01(P_adj<0.001)仅存在于抗体阳转组中;单倍型 DRB1*07:01-DQA1*02:01-DQB1*02:02-DPA1*02:01:01-DPB1*17:01(P_adj=0.011)仅存在于阴性组中;单倍型 DQA1*02:01-DQB1*02:02(P_adj=0.0003)在阴性组中的频率高于抗体阳转组。(3)HLAII 类分子锚定残基分析显示:DQA1-(-6)-V、DQA1-2-D、DQA1-199-A、DQA1-207-V、DRB1-10-13-QLKF、DRB1-30-32-CIY 残基在抗体阳转组中的频率高于阴性组(P<0.05)。DQB1-57-S、DRB1-28-D、DRB1-30-Y残基在抗体阳转组中的频率低于阴性组(P<0.05)。抗体阳转组GMT水平与HLA基因差异比较发现:携带等位基因DRB1*11:01组(1.09±0.232),其GMT水平低于DRB1*12:02组(1.340±0.377)和 DRB1*13:02 组(1.400±0.397);DPB1*02:01 组(1.180±0.278)低于 DPB1*04:01 组(1.32±0.349)和 DPB1*05:01 组(1.320±0.367);DPB1*13:01组(1.040±0.113)低于 DPB1*04:01 组(1.32±0.349),DPB1*05:01 组(1.320±0.367)和 DPB1*09:01 组(1.380±0.357);DQA1*05:05 组(1.150±0.226)低于 DQA1*06:01组(1.36±0.398)。(4)抗原肽预测结果:DQA1*02:01-DQB1*02:01 二聚体与 DQA1*02:01-DQB1*02:02二聚体可能结合的抗原表位相同。(5)HLA-DM关联分析结果显示:HLA-DMA,DMB基因的等位基因频率和单倍型频率在抗体阳转组和抗体阴性组间的分布差异均无统计学意义。结论:(1)HLA-DQB1*02:01 及其单倍型 DRB1*07:01-DQA1*02:01-DQB1*02:01-DPA1*01:03-DPB1*04:01,DQA1*02:01-DQB1*02:01,与乙脑灭活疫苗抗体阳转相关,而 HLA-DQB1*02:02 及其单倍型 DRB1*07:01-DQA1*02:01-DQB1*02:02-DPA1*02:01-DPB1*17:01,DQA1*02:01-DQB1*02:02 与乙脑灭活疫苗抗体阴性相关。(2)锚定残基 DQA1-(-6)-V、DQA1-2-D、DQA1-199-A、DQA1-207-V、DRB1-10-13-QLKF、DRB1-30-32-CIY 与乙脑灭活疫苗抗体阳转相关,DQB1-57-S、DRB1-28-D、DRB1-30-Y与抗体阴性相关。而携带不同HLAII类基因的个体,JEV抗体水平不同。(3)携带等位基因 DRB1*11:01、DPB1*02:01、DPB1*13:01、DQA1*05:05 的个体,其 GMT 水平较低,携带等位基因 DRB1*12:02、DRB1*13:02、DPB1*04:01、DPB1*05:01、DPB1*09:01、DQA1*06:01 的个体,其 GMT 水平较高。第二部分HLA-DM基因多态性与HCV慢性感染的关系目的:探究HLA-DM基因多态性与HCV慢性感染的关系。方法:以HCV慢性感染者185名,健康对照180名为研究对象,对HLA-DMA,-DMB基因进行分型,计算这两个基因在病例组和对照组中的基因频率,构建单倍型,比较两组间的分布差异。结果:各等位基因频率在HCV慢性感染组和健康对照组中的分布差异无统计学意义(P>0.05),单倍型DMA*01:01-DMB*01:03在病例组中的频率显著高于对照组(0.287 vs 0.197,OR=0.134,95%CI 为 1.529-2.305,P_adj=0.030)。结论:单倍型DMA*01:01-DMB*01:03可能与HCV慢性感染相关。