黑老虎叶提取物化学成分分析及其在化妆品原料中的应用研究

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黑老虎(Kadsura coccinea)为五味子科南五味子属的常绿木质藤本野生植物,其根及蔓茎做为一种民间药物在《岭南采药录》、《湖南药物志》、《广西本草选编》等均有记载。近年来,黑老虎果实作为一种特色水果在我国南部多个地区有广泛种植,枝叶常作为修剪废物被丢弃。本文以黑老虎叶为研究对象,在化学成分类型检识的基础上对主要成分进行含量测定,然后建立总黄酮提取、纯化工艺,并对提取物抗衰老、美白和抗过敏功效及安全性进行研究,最后开发一款黑老虎叶面膜配方,为黑老虎叶提取物作为化妆品原料开发应用提供科学依据。主要成果如下:(1)采用化学检识方法确定黑老虎叶中化学成分类别,结果显示主要有糖类、总蛋白、黄酮、有机酸、酚类、三萜等;紫外-分光光度法测定主要化学成分含量为:总糖1.12%、总蛋白0.40%、多酚1.81%、黄酮1.79%、三萜7.65%、木脂素8.81%。(2)采用超声法提取黑老虎叶中总黄酮,通过单因素和正交实验,确定的最佳提取工艺参数为:质量浓度60%乙醇,料液比1∶60(g/m L),提取时间60 min,提取温度50℃;在此工艺下黑老虎叶中总黄酮提取率为80.4%,提取物得率为20.1%,粗提取物中总黄酮含量为7.2%、总糖为30.2%、总蛋白为10.0%、总多酚为7.8%、总黄酮为7.2%、总木脂素为17.6%、总三萜为13.7%。(3)以总黄酮为指标采用大孔吸附树脂对黑老虎叶提取液进行纯化,结果显示最佳大孔吸附树脂型号为AB-8,上样工艺参数为:料液浓度1.01 mg/m L,p H值3,流速3 BV/h,体积5 BV;洗脱工艺参数为:质量浓度80%乙醇,流速3 BV/h,体积4 BV。在此工艺条件下,纯化提取物中黄酮含量为30.7%、总糖为25.3%、总蛋白为8.2%、多酚为37.6%、木脂素为26.9%、三萜为38.9%;(4)采用化学法和细胞模型法对黑老虎叶提取物进行抗衰老功效研究,结果显示粗提取物和纯化提取物对DPPH自由基半清除浓度分别为0.04376 mg/m L、0.01030mg/m L,对ABTS自由基半清除浓度分别为0.07713 mg/m L、0.03070 mg/m L,铁离子还原能力试验结果显示当粗提取物和纯化提取物都为0.50 mg/m L时,纯化提取物Trolox当量为1.341μmol/L大于粗提取物的1.164μmol/L;形态学观察及细胞数量测定结果显示不同浓度粗提取物和纯化提取物能极显著增加H2O2损伤的成纤维细胞数量,且纯化提取物明显强于粗提取物;细胞活性氧和抗氧化酶活力测定显示,粗提取物终浓度在0.01~0.20 mg/m L范围内、纯化提取物终浓度在0.0025~0.050 mg/m L范围内均能显著或极显著降低活性氧含量,MDA、SOD和CAT活力也显著或极显著降低,对GSH-PX活力没有影响。(5)采用化学法和细胞模型法对黑老虎叶提取物进行美白功效研究,粗提取物对酪氨酸酶半抑制浓度为3.257 mg/m L,纯化提取物酪氨酸酶半抑制浓度为0.4791mg/m L,纯化提取物对酪氨酸酶抑制作用大于粗提取物;小鼠B16F10细胞存活结果显示在试验设置浓度范围内,黑老虎叶提取物对细胞均没有毒性;测定对照组和样品组小鼠B16F10细胞胞内酪氨酸酶活力,结果显示粗提取物组和纯化提取物组均与对照组存在显著性差异,随着样品浓度的增加,酪氨酸酶活力逐渐下降,在试验设置浓度范围内,粗提取物组的酪氨酸酶活力比纯化提取物组更强,即纯化提取物组具有更好的抑制酪氨酸酶效果。(6)采用化学法对黑老虎叶提取物进行抗过敏功效研究,粗提取物和纯化提取物对透明质酸酶半数抑制浓度分别为0.1910mg/m L、0.0376 mg/m L,纯化提取物抗过敏效果大于粗提取物。(7)采用急性毒性试验对黑老虎叶纯化提取物进行安全性初步评价,给药剂量为5001 mg/kg,小鼠经口灌胃提取物无明显毒性反应;给药剂量为2180 mg/kg,大鼠经皮肤涂拭提取物无明显毒性反应。(8)以黑老虎叶纯化提取物为功效成分进行一款面膜液配方研制:组成配方为羧甲基纤维素钠0.50 g、甘油5.00 g、丙二醇1.0 g、黑老虎叶纯化提取物10.0 mg,蒸馏水定容至100 m L组成,黑老虎叶面膜液对DPPD自由基半清除浓度为0.02387 mg/m L、对酪氨酸酶活性半清除浓度为2.296 mg/m L,且该面膜4个月内DPPD自由基清除率、酪氨酸酶活性抑制率和外观均无明显变化。
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