Fas基因转染瘢痕疙瘩成纤维细胞并诱导其凋亡的实验研究

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前段实验提示:瘢痕疙瘩成纤维细胞表现出抗Fas介导的细胞凋亡,PCR-SSCP检测发现其Fas基因存在突变。本实验将正常人Fas cDNA基因导入瘢痕疙瘩成纤维细胞中,使其表达功能正常的Fas蛋白,通过Fas单克隆抗体[FasMcAb(IgM型)]诱导,观察瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡情况。方法 利用分子克隆技术将人Fas cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点之间;以脂质体介导法将目的基因导入瘢痕疙瘩成纤维细胞;Fas单克隆抗体诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞;通过琼脂糖凝胶电泳、HE染色和流式细胞仪检测瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡情况。结果 转基因的瘢痕疙瘩成纤维细胞经FasMcAb作用后,在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂;琼脂糖凝胶电泳显现特征性的“梯状”带;流式细胞仪检测瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡率明显增加。对照组未见上述结果。结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas诱导的凋亡异常,是由于Fas凋亡通路的“上游事件”无功能Fas蛋白造成,与通路下游无关。瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡异常可能是瘢痕疙瘩形成的重要原因。
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